膜体系酵母文库构建
发布时间：
2021-01-25 09:06
来源：
酵母双杂交技术，是利用酵母遗传学方法分析蛋白质间的相互作用，被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学领域，已成为分子生物学研究领域的重要实验手段。经过不断的完善和发展，不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用，还可发现与已知蛋白相互作用的未知蛋白。传统的酵母双杂交系统，仅限核蛋白的互作分析，不能进行膜蛋白的研究。
DUALmembrane 系统是基于分离的泛素介导的膜蛋白酵母双杂交系统，不同于常规酵母双杂交系统的蛋白体内分析方法，使得分析膜蛋白间的互作成为现实。主要特点是可以进行膜蛋白-膜蛋白、膜蛋白-可溶性蛋白间的互作研究。它既可以用于表达文库的筛选，也可以应用于两个已知蛋白(其中一个属于膜蛋白)间互作关系的验证
DUALmembrane 系统
DUAL membrane 系统(DUAL membrane system)首先由瑞士的Dualsystems Biotech AG 公司开发出来，是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统，泛素可以分成两部分表达，即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub)，后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白，NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白体系，断裂的泛素的两部分分别连接一个蛋白且两个蛋白之间存在相互作用。它提供了不同于常规酵母双杂交系统的蛋白体内分析方法，使得分析膜蛋白间的互作成为现实。
技术优点
在体内原位检测蛋白-蛋白间的相互作用而无需核定位信号使用小的泛素结构域(NubG/Cub)使得相互作用蛋白质之间的空间位阻最小化蛋白间的互作信号靠泛素特异性结合蛋白(UBPs)剪切人工转录因子(LexA)启动，而不是靠转录，因此可以检测蛋白自身的转录激活或抑制序列此体系可用来研究两个膜蛋白的相互作用和一个膜蛋白与一个胞质蛋白的相互作用任何一种膜蛋白都可以作为诱饵，能使与待检测蛋白融合的相互作用模块(Cub-PLV-NubG)定位在细胞质内。
瑞源特色
具有丰富的样品处理经验和建库经验，提供膜体系酵母双杂交文库服务，可构建普通酵母双杂文库和均一化酵母双杂文库，快速、高效地获得高质量的膜体系酵母双杂文库。
样本要求
组织：100-200mg，细胞：≥10^6，Total RNA:≥1μg，OD260/280为1.8-2.2。注：植物材料应该用幼嫩部位，以确保文库质量
交付内容
酵母表达文库甘油菌1.5ml EP管（4管），酵母表达文库质粒1.5ml EP（4管＞200μg），Word文档电子版项目报告（含实验数据）。
文库承诺达到以下指标：
文库库容量>1*10^7CFU，平均插入片段0.8--1.5 kb (因物种而异)，空载率<5%，文库质粒>200ug。
欢迎各位来电咨询：400-863-8520
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酵母是一种单细胞真核微生物，具有快速繁殖、基因组较小、遗传操作方便等特点，被广泛用作模式生物，研究其在不同逆境条件下的基因表达和功能。非生物胁迫包括对生物生长和发育不利的环境因素，如高温、低温、高盐、低氧、重金属、药物等。非生物胁迫条件下，酵母会启动应激反应，调节基因表达，增强抗逆性。
许多真核生物的转录激活因子均具有2个功能上独立的结构域———DNA 结 合 结 构 域 （DNA-binding domain BD） 和 DNA 激活结构域（Activation domain AD），前者特异结合于顺式作用元件上，后者实施基因表达调控功能，因此 DNA结合结构域和DNA激活结构域就可以分开使用，单独的结合结构域或转录激活结构域都不能启动下游报道基因的表达。
抗体在细胞内的表达已成功用于消除蛋白质功能。这一发现表明，该技术应对疾病治疗和功能基因组学有影响，其中预测功能未知的蛋白质基因组序列。一个主要的障碍是一些抗体在真核细胞中不起作用，大概是因为抗体在细胞质中不正确地折叠。为了克服这个问题，我们已经开发了一种使用酵母双杂交体系用于筛选细胞内功能抗体的方法。我们发现几种特征抗体在真核细胞中以双杂交形式结合它们的靶抗原，我们已经能够从在体外结合抗原的scFv组中分离细胞内结合的物质。
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