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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
细胞稳转（稳定转染）是将外源基因整合到宿主细胞基因组中，使其随细胞分裂稳定遗传并长期表达的技术。与瞬转相比，稳转细胞系弥补了外源基因表达时间短、随细胞传代丢失的缺陷，适合长期功能研究。
实验原理
通过慢病毒感染或质粒转染将目的基因和抗性筛选标记一同导入细胞。外源DNA整合至宿主染色体后，利用抗生素（嘌呤霉素、潮霉素等）持续筛选，淘汰未整合的细胞。存活下来的细胞经单克隆分离扩增，即为稳定表达目的基因的稳转细胞系。
技术路线
服务优势
1、长期稳定表达：基因随细胞传代稳定遗传，适合数周至数月的长期实验。
2、均一性好：单克隆筛选后，细胞间表达水平一致，实验重复性高。
3、可构建疾病模型：持续过表达致癌基因或敲低抑癌基因，用于肿瘤等机制研究。
应用场景
1、基因长期功能研究。
2、药物筛选与靶点验证（稳定报告细胞株）。
3、蛋白持续生产与纯化。
4、疾病模型构建（过表达突变型癌基因/抑癌基因）。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、载体构建/基因合成
15个 1、表达质粒（2 ug左右）；
2、稳定转染鉴定结果：根据客户要求提qRT-PCR鉴定报告或Western blot鉴定报告；
3、稳定转染且验证达标后的细胞株以T25或冻存的细胞的形式寄出；
4、原始数据、结果图片、完整的实验报告。
2、细胞培养与转染 15个 3、稳株筛选
A、筛选
B、鉴定
105个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells），提供细胞名称和培养方式 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送。
菌液 提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
如图所示，该细胞株经过抗性加压筛选和单克隆化，目的蛋白表达水平稳定且均一，表明成功构建了稳定过表达细胞株。结果如下（图1、2）：
图 1 单克隆产量
图 2 表达鉴定
与细胞瞬转的核心区别
类型 细胞稳转 细胞瞬转 外源DNA状态 整合至基因组 游离于核内 表达时长 可长期持续表达 24-96小时 均一性 单克隆株均一 细胞间差异大 操作复杂程度 高，需病毒包装或长期筛选 低，直接转染即可 筛选标记 必需（嘌呤霉素/潮霉素等抗性基因） 通常无需 适用场景 长期功能研究、药物筛选 快速功能验证、蛋白瞬时表达、病毒包装
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
