科研服务
立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务
瑞源生物
相关产品
- 产品描述
-
原理
蛋白体外磷酸化实验是在体外模拟体内蛋白激酶催化的磷酸化反应，通过纯化底物蛋白/激酶、ATP(磷酸供体)及适宜缓冲体系，在受控条件下实现蛋白磷酸化，并检测其修饰状态与位点。
Phos-tag SDS-PAGE是一种磷酸亲和电泳技术，可使用常规SDS-PAGE程序分离磷酸化和非磷酸化蛋白质。Phos-tag是一种能与磷酸基团特异性结合的化学试剂，核心结构是一个金属离子(如Zn2+或Mn2+)配合物，可选择性结合蛋白质上的磷酸化氨基酸(如磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸)，使蛋白迁移率变慢。
实验流程
应用场景
1、激酶-底物作用关系验证
2、磷酸化功能位点鉴定
3、蛋白互作与功能调控分析
4、药物靶点与抑制剂筛选
5、植物抗逆/发育等分子信号通路的机制研究
优势
1、反应体系可控：可精准调控反应时间、温度等条件，排除胞内背景干扰，结果特异性强；
2、直接验证：可直接验证激酶与底物磷酸化作用，规避体内间接调控、多级信号干扰问题；
3、核心位点验证：结合突变体实验可快速定位关键磷酸化位点，明确功能核心位点，为机制解析提供精准分子依据；
4、周期短、效率高：无需构建稳转转基因材料，体外生化反应快，大幅缩短验证周期；
5、适用范围广：可适配动植物、微生物等各类来源蛋白，支持多方向研究，通用性强；
6、体系稳定成熟：已建立自营标准化SOP，蛋白纯化、磷酸化反应体系成熟，稳定可控；
7、精准省心可靠：提供从蛋白表达纯化、体外激酶反应、位点验证到结果解析的一站式闭环技术服务；
8、定制化服务：可定制化优化反应条件，适配不同激酶-底物组合。
服务内容
收样标准
类型 送样标准 运输条件 五选一 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/μL，体积>20μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500μL；
提供载体序列和抗性，无污染，去内毒。
干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 平板菌 无污染 常温 纯化后的目标蛋白 >30μg 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 常见标签抗体无需提供 抗体 IP级别抗体>30μL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 交付内容
实验材料 周期 交付材料 1、基因合成 / 载体构建 14天 1、原始数据、结果图片
2、标准实验报告(含实验步骤、流程)
3、含有目的基因的质粒及测序报告
4、实验剩余蛋白2、原核蛋白表达 20天 3、体外磷酸化检测
A、体外孵育反应
B、磷酸化检测（WB鉴定）
15天 案例展示
MBP-B（左）、His-A（右）蛋白纯化结果
A. CBB鉴定，M：Marker，1：诱导后样品，2：亲和纯化后样品。
B. WB鉴定，M：Marker，1：诱导后样品，2：亲和纯化后样品。
体外磷酸化检测
结果分析：磷酸化检测中，MBP-B和His-A单独孵育不会检测到磷酸化信号，而MBP-B和His-A同时孵育后可以检测到MBP-B的磷酸化信号，表明HIS-A在体外可以催化MBP-B的磷酸化。
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
