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服务描述
Pull down MS是用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的两种技术的组合;
Pull down(下拉):利用一种“诱饵”分子从复杂的生物样品(如细胞裂解液)中特异性地“钓出”与其直接或间接相互作用的“猎物”分子。
MS(质谱分析):使用质谱技术对钓取的“猎物”进行定性和定量分析,从而发现新的相互作用蛋白。

应用领域
蛋白质相互作用筛选、药物靶点发现。
技术优势
高灵敏度:可检测低丰度互作蛋白;
高覆盖率:一次性鉴定数百种潜在互作蛋白;
灵活性强:适用于各种标签系统(GST、His、MBP等)的实验设计;
专业分析:提供深入的生物信息学解读(差异蛋白的筛选、表达模式聚类分析、互作网络分析等。
服务流程、周期及交付

服务内容 周期(工作日) 交付内容 可选服务:
1、基因合成(密码子优化/密码子不优化)
2、目的基因测序+载体构建
3、已将目的基因构建pET28a-His/pET32a-T1xA-His/pGEX-6P-1-GST/PET28a-MBP载体,目的基因测序验证
4、原核蛋白表达
30 1、表达质粒(2μg左右);
2、实验相关原始图片:原核蛋白表达SDS-PAGE鉴定、Pull down WB鉴定图片;
3、标准的蛋白表达服务报告。
Pull down
1、提取总蛋白
2、表达成功的蛋白与总蛋白孵育
3、蛋白纯化
4、WB鉴定
10 LC-MS质谱分析 14 总计 54 样品接受标准
类型 要求 运输条件 总蛋白样品 体积>500μl 干冰寄送,干冰使用量:1天(5kg)、2-3天(10-20kg)、3-5天(20-30kg) 纯化后的目标蛋白
蛋白量>30μg 注意:1、其余类型样品请提前与我司沟通;2、干冰取样及运输,至少在送样前2天通知我司。 案例报告
转化子筛选
为鉴定是否正确插入目的基因,从平板中随机挑取菌落保存到对应平板上并进行菌落PCR,结果显示成功转入目的基因。

图:转化子菌落PCR
原核蛋白表达
挑选上述保存的正确克隆检测目的蛋白表达情况,结果显示目的蛋白成功表达。

图:SDS-PAGE检测
Pull down
pull down技术拉取植物总材料中与AAA蛋白互作的其他蛋白。

图:Pull down检测图
LC-MS(部分结果图)
基于质谱检测得到的Raw文件,进行对应数据的生物信息学分析。

图:差异表达蛋白聚类图

图:差异表达蛋白GO注释分类统计图
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