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    Pull down MS

    Pull down MS是用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的两种技术的组合: Pull down(下拉):利用一种“诱饵”分子从复杂的生物样品(如细胞裂解液)中特异性地“钓出”与其直接或间接相互作用的“猎物”分子。 MS(质谱分析):使用质谱技术对钓取的“猎物”进行定性和定量分析,从而发现新的相互作用蛋白。

    • 产品描述
    •  

      服务描述

      Pull down MS是用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的两种技术的组合;

      Pull down(下拉):利用一种“诱饵”分子从复杂的生物样品(如细胞裂解液)中特异性地“钓出”与其直接或间接相互作用的“猎物”分子。

      MS(质谱分析):使用质谱技术对钓取的“猎物”进行定性和定量分析,从而发现新的相互作用蛋白。

       

      应用领域

      蛋白质相互作用筛选、药物靶点发现。

       

      技术优势

      高灵敏度:可检测低丰度互作蛋白;

      高覆盖率:一次性鉴定数百种潜在互作蛋白;

      灵活性强:适用于各种标签系统(GST、His、MBP等)的实验设计;

      专业分析:提供深入的生物信息学解读(差异蛋白的筛选、表达模式聚类分析、互作网络分析等。

       

      服务流程、周期及交付

      服务内容周期(工作日)交付内容

      可选服务:

      1、基因合成(密码子优化/密码子不优化)

      2、目的基因测序+载体构建

      3、已将目的基因构建pET28a-His/pET32a-T1xA-His/pGEX-6P-1-GST/PET28a-MBP载体,目的基因测序验证

      4、原核蛋白表达

      30

      1、表达质粒(2μg左右);

      2、实验相关原始图片:原核蛋白表达SDS-PAGE鉴定、Pull down WB鉴定图片;

      3、标准的蛋白表达服务报告。

      Pull down

      1、提取总蛋白

      2、表达成功的蛋白与总蛋白孵育

      3、蛋白纯化

      4、WB鉴定

      10
      LC-MS质谱分析14
      总计54

       

      样品接受标准

      类型要求运输条件
      总蛋白样品体积>500μl干冰寄送,干冰使用量:1天(5kg)、2-3天(10-20kg)、3-5天(20-30kg)

      纯化后的目标蛋白

      蛋白量>30μg
      注意:1、其余类型样品请提前与我司沟通;2、干冰取样及运输,至少在送样前2天通知我司。

       

      案例报告

      转化子筛选

      为鉴定是否正确插入目的基因,从平板中随机挑取菌落保存到对应平板上并进行菌落PCR,结果显示成功转入目的基因。

      图:转化子菌落PCR

       

      原核蛋白表达

      挑选上述保存的正确克隆检测目的蛋白表达情况,结果显示目的蛋白成功表达。

      图:SDS-PAGE检测

       

      Pull down

      pull down技术拉取植物总材料中与AAA蛋白互作的其他蛋白。

      图:Pull down检测图

      LC-MS(部分结果图)

      基于质谱检测得到的Raw文件,进行对应数据的生物信息学分析。

      图:差异表达蛋白聚类图

       

      图:差异表达蛋白GO注释分类统计图

       

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