配套服务
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▼ 产品编号
CRISPR/Cas9敲除试剂盒适用于双子叶植物,能够通过一步反应将 gRNA 靶点序列快速高效地构建至Cas9/gRNA 质粒中,直接用于植物遗传转化。该载体的真核与原核抗性均为Kan,Cas9蛋白经密码子优化改造,采用拟南芥U6启动子表达gRNA序列。
▼ 产品规格
10T;货号:RY8032。
▼ 保存条件
-20 ℃保存,有效期1年。
▼ 产品组分
组分 | 规格 |
Vector-RYTD01 | 20μl |
Buffer | 600μl |
Enzyme Mix | 50μl |
CX-F | 30μl |
CX-R | 30μl |
▼ 产品优势
构建时间短:2小时快速构建双子叶植物CRISPR Cas9单敲载体。
敲除效率高:载体针对拟南芥U6启动子及Cas9蛋白进行优化,经检验构建成功率超98%。
自备材料少:仅需准备sgRNA引物。
▼ 实验指南
1、 引物退火
2、 连接反应
3、 载体鉴定
▼ 注意事项
1、sgRNA的长度设计不宜过长,以免影响结合精度。
2、若无合适PCR仪进行DNA oligo梯度降温退火,也可将配置好的反应体系在95℃ 2min充分变性后,放置于室温自然降温,但结合效率会大大降低。
▼ 案例展示
1、该片段中包括U6启动子、sgRNA和gRNA scaffold元件,可直接用于一代测序。

图:测序引物(CX-F/R)pcr鉴定结果
2、 CX-F及DNA oligo R PCR扩增鉴定, 使用RY8032 sgRNA连接成功率超98%。

图:sgRNA连接成功率检测
3、 使用RY8032拟南芥PPO基因单靶点敲除成功率超95%。

图:拟南芥PPO基因编辑苗测序比对结果
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