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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
双分子荧光互补（BiFC）技术利用荧光蛋白（如YFP）被分割成的两个无活性的片段，分别与目标蛋白A和B融合。当A与B在活细胞中发生特异性相互作用时，两个荧光片段被拉近并重构为完整的荧光蛋白，从而发出荧光。该技术可用于直观、原位检测蛋白质间的互作。
服务优势
1、活细胞原位检测：无需裂解细胞，可在接近生理条件下观察蛋白质相互作用，保留天然的空间构象与动态变化。
2、亚细胞定位信息：荧光信号直接反映互作发生的具体位置（如细胞核、质膜、细胞器等），有助于判断互作的功能场景。
3、灵敏度较高：能检测弱、短暂或瞬时相互作用，甚至可捕获不稳定的复合体。
4、样本适用性广：覆盖多种哺乳动物细胞及组织样本。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、载体 15个 1、重组质粒、大肠杆菌菌液各一份；
2、重组质粒测序结果；
3、实验原始图片，设置1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照，其中每组包含YFP、DAPI、Merge各1张。实验组设置3次重复。
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、293T细胞培养
3、293T细胞铺板
4、293T细胞转染
15个 5、细胞荧光检测
6、数据整理
5个 收样信息
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）
或冻存细胞（>1×106 cells）
1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
菌液 提供抗性，菌液量>0.5mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
结果与分析：为了验证A与B是否互作，我们在293T细胞中利用BiFC的方法。从图中可以看出A与B互作，并且发生在细胞核中。
图 A和B在293T细胞中的互作情况
注意事项
1、BiFC无法定量互作强度：荧光强度主要与蛋白表达量相关，而非互作强度，不应据此判断相互作用的强弱。
2、温度敏感性：YFP片段在30℃以下可正常互补形成完整荧光蛋白，温度过高可能影响荧光恢复。
3、不可逆性：BiFC形成的荧光蛋白复合物一经组装便不再解离，不适合研究实时、可逆的动态互作过程。
4、对照设置必须完整：缺少任一对照都会影响实验结果的可靠性。
常见Q&A
Q：哺乳动物细胞BiFC中应选择哪种荧光蛋白分裂片段？
A：推荐使用Venus（YFP增强突变体），在173/174位氨基酸处分割为VN173（1-173）和VC155（155-238），激发514 nm/发射527 nm，亮度高、成熟快。
Q：如何确定目标蛋白与荧光片段的融合方向？
A：同时构建N端和C端两种融合构型（共4种组合：A-VN/B-VC、A-VC/B-VN等），平行测试以找到最优方向，必要时在两者间添加(GGGGS)₃柔性Linker。
Q：BiFC实验必须设置哪些对照？
A：至少设置四组：VN+VC空载、VN-A+VC空载、VN空载+VC-B、以及已知互作的阳性对照（如bJun/bFos）。
Q：BiFC结果为阳性，是否需要其他方法验证？
A：需要。BiFC存在假阳性风险，建议采用Co-IP、PLA（邻位连接技术）或共定位分析等独立方法交叉验证。
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
