原核基因编辑

CRISPR/Cas 系统可以把侵入细菌的噬菌体遗传物质整合到自身基因组一个或者多个CRISPR位点作为永久的“记忆”，当细菌被再次入侵的时候，CRISPR 位点被转录生成 CRISPR RNAs（crRNAs)。crRNA 随后会引导 DNA剪切酶 Cas9 根据序列互补的原则剪切入侵的外源核酸序列。

所属分类

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产品描述

服务描述

源于 CRISPR/Cas 系统的基因组编辑技术被工程化为一段介导定位作用的 RNA 序列（guide RNA和crRNA合二为一的杂合RNA序列，称为sgRNA）加上一个DNA水解酶Cas9组成的二元系统。通过Cas蛋白与向导RNA（sgRNA）的复合体靶向特定DNA序列，实现基因敲除、敲入或定点修饰。CRISPR-Cas9已经被广泛应用于活细胞内核酸的编辑、检测等各个领域。

技术要素

自主设计的广宿主载体

高活性Cas蛋白变体

精准sgRNA设计

技术优势

高效编辑：针对常见原核宿主（如大肠杆菌），基因敲除效率可达90%以上

低脱靶率：数据库精准设计sgRNA序列，降低脱靶风险

广泛应用范围：常见MG1655、stbl3、DH10B、stable，Bl21(DE3)等菌株均可

全程技术支持：专业的技术支持为您提供实验设计、数据分析、疑难解答等服务，从靶点设计开始，每一节点严格监

样品接受标准

类型	送样标准	运输条件
需要基因合成的序列	无	无
构建好的质粒中间载体质粒	浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。	冰袋
含构建好质粒的菌液含中间载体质粒的菌液	体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌	无污染	常温

*如需特殊载体构建或表型分析，需提前说明

服务流程

服务流程	工作日	交付材料
客户下单	10个	1、敲除成功的菌株甘油菌、平板; 2、测序文件； 3、电子版实验报告1份
基因合成/质粒验证	10个
CRISPR敲除靶点设计	30个
敲除模块构建
载体构建与质粒提取
化学转化与电转化
PCR验证
测序鉴定
阳性克隆扩增
结果鉴定

常见问题

1、Crispr/Cas9基因敲除和RNAi干扰的对比

从抑制基因表达的效率上来讲，RNAi是在转录后水平降低基因表达，而Crispr/Cas9则可以靶向DNA并永久改变或敲除基因表达。有些时候可能需要Crispr/Cas9来完全敲除，以免残留的低水平蛋白表达造成任何不确定的影响。从脱靶效应上来讲，由于CRISPR系统必须在转录起始位点附近才能发挥作用，其脱靶效率要远低于RNAi。

案例报告

转化效率分析：电转化后平板可见密集单菌落，长斑正常