玉米转录因子文库

转录因子文库是一种包含了多种转录因子的集合，通过收集一系列转录因子的开放阅读框(ORF)克隆，这些克隆是通过各种遗传学和分子生物学技术获得的cDNA。有了转录因子文库可以直接将转录因子基因构建于载体中，便于进行下一步的筛选。

所属分类

大分子互作平台

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产品描述

技术背景

以往通过酵母单杂交（Y1H）或酵母双杂交（Y2H）筛选时涉及筛选Gal4-AD-cDNA文库，其中使用的文库中含有许多不需要的克隆。筛选效率可能受到组织特异性、样本采集时间点和靶标表达强度的限制。研究发现在酵母单杂交和双杂交筛选时，使用转录因子文库可以大大提高筛选效率以及结果的准确度。

转录因子文库筛选原理

转录因子文库可以用于Y1H筛选调控启动子的转录因子，也可应用普通的核蛋白Y2H筛选与之相互作用的转录因子。二者原理类似，相比较而言更常用的Y1H筛选调控启动子的转录因子。

酵母单杂交筛选转录因子文库

酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子，GAL4的DNA结合结构域靠近羧基端，含有几个锌指结构，可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS)，而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFIID相互作用，提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中，DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。据此，我们可将GAL4的DNA结合结构域与目的基因连接作为诱饵质粒，对转录因子文库进行筛选，可以有效筛选到与目的基因互作的转录因子。

酵母双杂交筛选转录因子文库

Gal4 转录因子由 DNA 结合域（binding domain，BD）和转录激活域（active domain，AD）组成，二者可以分开独立表达为有功能的蛋白。当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子活性，基于此，把目的蛋白与 BD融合作为诱饵，对转录因子文库进行筛选，可以有效筛选到与目的蛋白互作的转录因子。

技术优势

1、筛选结果为全长cDNA，避开移码问题

2、筛选结果可直接用于下游实验，无需一对一重复验证

3、转录因子文库可以用于酵母单/双杂筛选

4、玉米转录因子文库涵盖81个转录因子家族，所含全长cDNA数量在1900以上

送样指南

1、目的基因序列（基因ID）

2、含有目的基因的载体质粒

3、将目的基因构建到目标载体的诱饵质粒

类型	送样标准	运输条件
诱饵基因序列	无	无
构建好的诱饵质粒	质粒浓度≥100ng/ul，质粒体积≥30ul；有鉴定测序文件；	冰袋
诱饵质粒菌液	每管体积≥500ul；有鉴定测序文件；	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）

产品参数

家族文库分类

文库载体

文库菌株

诱饵载体

诱饵菌株

服务内容

玉米转录因子文库

pGADT7

AH109

双杂：pGBKT7

单杂：pHIS2

双杂：AH109

单杂：Y187

酵母单/双杂交筛选

玉米转录因子家族

ABI3VP1	Alfin-like		AP2-EREBP	ARF	ARID
ARR-B	AUX/IAA	BBR-BPC		bHLH	BSD
bZIP	BZR	C2C2-CO-like		C2C2-DOF	C2C2-GATA
C2C2-YABBY	C2H2	C3H		CCAAT-DR1	CCAAT-HAP2
CCAAT-HAP3	CCAAT-HAP5	coactivator-p15		CPP	CSD
DBP	DDT	E2F-DP		EIL	FAR1
FHA	G2-like	GeBP		GNAT	GRAS
GRF	HB	HMG		HRT	HSF
IWS1	Jumonji	LIM		LOB	LUG
MADS	MBF1	MED26		MED31	MED6
MED7	mTERF	MYB		MYB-related	NAC
NLP	OFP	Orphans		PHD	PLATZ
RB	Rcd1-like	S1fa-like		SBP	Sigma70-like
SNF2	SRS	SWI-SNF-BAF60		SWI-SNF-SWI3	TAZ
TCP	TRAF	Trihelix		TUB	ULT
VOZ	WD40	Whirly		WRKY	ZF-HD
ZIM

服务内容

服务内容	工作日	交付内容
1、基因合成（密码子优化）/载体构建	10	1、阳性克隆测序结果（根据测序结果而定） 2、Word文档电子版项目报告（含实验数据） 3、诱饵质粒
2、诱饵质粒的自激活检测	7
3、诱饵质粒与文库质粒共转 4、酵母筛选的条件优化 5、筛选结果测序	10
6、数据整理和分析	3