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双分子荧光互补实验(BiFC)
荧光素酶互补(LCA)
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染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一种用于研究细胞内蛋白质与DNA是否相互作用的技术。其核心原理是通过甲醛等交联剂固定细胞中的蛋白质与DNA复合物,然后利用超声破碎或核酸酶酶切将染色质随机切断为小片段,利用特异性抗体捕获与目标蛋白质结合的DNA片段,最后通过PCR、qPCR或高通量测序等检测技术分析这些片段。
荧光素酶互补(LCA)是一种用来研究蛋白质之间的相互作用,将荧光素酶分为N端和C端两个部分,分别与不同的蛋白连接,在蛋白之间存在互作的情况下形成完整的荧光素酶,因此可以通过观察荧光信号来评估蛋白质之间的相互作用。
双分子荧光互补(Bimo-lecular fluorescence complementation,简称BiFC),将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段(N-fragment、C-fragment),将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B,如果A与B蛋白发生了相互作用,在空间上互相靠近,就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,在激发光的激发下,荧光蛋白发出荧光。反之,若A与B蛋白之间没有相互作用,则不能被激发岀荧光。
遗传报告基因系统目前广泛应用于真核基因表达和细胞生理学研究,单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,双报告基因常被用来提高实验准确性。 “双报告基因”指在一个系统中同时表达和测量两种单独的报告基因酶,通常,实验报告基因与特定实验条件产生的效应相关,共转染“对照”报告基因则为实验提供基准线,有效减少外在因素对实验结果产生的影响,提高实验数据可信度。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。与其他蛋白互作研究技术,比如酵母双杂、Pull-down等各有优势,其中Co-IP基于抗原和抗体之间结合,可以从复杂的细胞裂解液中特异性地分离和鉴定蛋白质复合体,对于理解蛋白质如何在细胞内相互作用以及它们如何影响细胞功能和信号传导至关重要。
本项目提供"基因-蛋白表达-功能验证"一站式技术服务,提供从基因设计到蛋白表达,再到DNA结合功能验证,确保客户获得高纯度、高活性的目标蛋白及科学可靠的功能分析数据。整个流程配备严格的质量控制体系,确保交付的蛋白产品符合后续实验要求。
pull down实验,是一种体外亲和纯化技术。把X,Y两种蛋白在体外分别表达纯化出来,再混合到一起,通过过X的抗体柱后,洗下柱子上的蛋白样,并检测其中是否含Y。如果X能把Y拉下来(即pulldown),说明它们有直接相互作用,否则没有。 X、Y蛋白的标签是不同的。