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免疫沉淀-质谱分析技术服务(IP-MS)
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。
荧光素酶互补(LCA)是一种用来研究蛋白质之间的相互作用,将荧光素酶分为N端和C端两个部分,分别与不同的蛋白连接,在蛋白之间存在互作的情况下形成完整的荧光素酶,因此可以通过观察荧光信号来评估蛋白质之间的相互作用。
双分子荧光互补(Bimo-lecular fluorescence complementation,简称BiFC),将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段(N-fragment、C-fragment),将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B,如果A与B蛋白发生了相互作用,在空间上互相靠近,就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子,在激发光的激发下,荧光蛋白发出荧光。反之,若A与B蛋白之间没有相互作用,则不能被激发岀荧光。
遗传报告基因系统目前广泛应用于真核基因表达和细胞生理学研究,单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,双报告基因常被用来提高实验准确性。 “双报告基因”指在一个系统中同时表达和测量两种单独的报告基因酶,通常,实验报告基因与特定实验条件产生的效应相关,共转染“对照”报告基因则为实验提供基准线,有效减少外在因素对实验结果产生的影响,提高实验数据可信度。
南京瑞源生物采用先进的Illumina测序平台,快速、高效地读取高质量的测序数据,以精准快捷为核心,准确检测样品间的重要变异信息,对候选基因进行注释后能通过荧光定量PCR、EMSA、酵母单杂、酵母双杂等实验进行候选基因验证。仅需客户提供原始材料,南京瑞源生物进行建库测序、BSA分析、基因挖掘、功能验证一条龙服务,节约客户等待时间。
南京瑞源生物在基于经典同源重组系统的基础上,通过自主研发优化构建载体和实验流程,开发了一项敲除效率和准确性均远高于传统方法的创新性的同源重组改良技术。该技术可以广泛应用于酵母的基因编辑。
实时荧光定量PCR技术(Real-time Quantitative PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团(包括荧光染料或荧光标记的特异性探针),对PCR产物进行标记跟踪,随着PCR反应的进行,反应产物不断累积,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号,这样即可通过荧光信号强度的变化实时监测整个PCR过程中产物量的变化,并结合相应软件对产物进行分析,可以得到荧光扩增曲线,从而计算待测样品中目的基因初始模版的量,常用于分析目的基因的表达水平的变化。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。与其他蛋白互作研究技术,比如酵母双杂、Pull-down等各有优势,其中Co-IP基于抗原和抗体之间结合,可以从复杂的细胞裂解液中特异性地分离和鉴定蛋白质复合体,对于理解蛋白质如何在细胞内相互作用以及它们如何影响细胞功能和信号传导至关重要。
pull down实验,又称下拉实验,是一种体外亲和纯化技术。把X,Y两种蛋白在体外分别表达纯化出来,再混合到一起,通过过X的抗体柱后,洗下柱子上的蛋白样,并检测其中是否含Y。如果X能把Y拉下来(即pulldown),说明它们有直接相互作用,否则没有。 X、Y蛋白的标签是不同的。
凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。
亚细胞定位是指某种蛋白或某个基因表达产物在细胞内的具体存在部位,如在胞核,胞浆内,细胞膜或某一特定细胞器上存在。蛋白分布在不同细胞的不同部位,对蛋白的亚细胞定位分析有助于蛋白功能研究的初步判断。