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    科研服务

    立足于生命科学,为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务

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    酵母文库构建(In-Gate 技术)

    南京瑞源生物在基于经典SMART、gateway文库构建的方法基础上,通过自主研发优化载体和实验流程,不进行BP反应,并且基因完整性和准确性高于传统gateway方法。

    • 产品描述
    • 技术原理

      同源重组系统是微生物基因编辑最经典的方法,可以实现对DNA分子的敲除、点突变、敲入等多种修饰。该技术已被广泛地用于基因组DNA,如细菌人工染色体、大肠杆菌染色体等的遗传修饰研究以及基因工程药物的研究和开发中。

       

      服务简介

      南京瑞源生物在基于经典SMART、gateway文库构建的方法基础上,通过自主研发优化载体和实验流程,不进行BP反应,并且基因完整性和准确性高于传统gateway方法。

      技术优势

      1、具备多种材料 RNA 提取方法,高质量 RNA 有效提高后续文库质量
      2、完善的质检流程,文库进行 PCR 鉴定与测序,确保物种正确
      3、提供后续文库售后和下游筛库指导
      4、建库一年送三险,运输损坏险、储存不当险、意外丢失险,解决后顾之忧
      5、根据不同的载体需求,提供文库个性化定制

       

      交付材料

      (In-Gate)酵母膜文库构建

      服务内容工作日交付材料

      1. RNA提取

      2. mRNA提取

      5个

      1.酵母文库甘油菌 4 ml (分4管)

      2.酵母文库质粒(4管 >400 μg

      3.Word文档电子版项目报告(含实验数据)

      4.文库承诺达到以下指标:

      文库库容量>1*107CFU

      平均插入片段0.8 - 1.5 kb (因物种而异)

      空载率<5%

      3. cDNA合成

      4. cDNA与接头连接

      5. cDNA分级分离

      5个

      6. 重组到酵母载体pPR3-N上和电转化

      7. 将获得的cDNA 文库电转化至大肠杆菌感受态细胞中进行克隆扩增

      5个
      8. 文库检测和质粒提取5个
      9. 数据整理和分析2个
      10. 转录组测序、文库全测序、GO+KEGG分析15个

       

      (In-Gate)酵母核文库构建

      服务内容工作日交付材料

      1. RNA提取

      2. mRNA提取

      5个

      1.酵母文库甘油菌 4 ml (分4管)

      2.酵母文库质粒(4管 >400μg

      3.Word文档电子版项目报告(含实验数据)

      4.文库承诺达到以下指标:

      文库库容量>1*107CFU

      平均插入片段0.8 - 1.5 kb (因物种而异)

      空载率<5%

      3. cDNA合成

      4. cDNA与接头连接

      5. cDNA分级分离

      5个

      6. 重组到酵母载体pGADT7上和电转化

      7. 将获得的cDNA 文库电转化至大肠杆菌感受态细胞中进行克隆扩增

      5个
      8. 文库检测和质粒提取5个
      9. 数据整理和分析2个
      10. 转录组测序、文库全测序、GO+KEGG分析15个

      取样方法及注意事项

      快速收集

      样本需要在采集、制备、储存、运输中尽量做到迅速和及时性,尽可能缩短样本采集到实验的周期,从而保证样本的质量和稳定性。

       

      低温保存(鲜样样本)

      采集样本离体后,如有分离步骤需要在4℃条件或冰上等低温环境下进行,分离好的样本立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,并保证在实验前处于-80℃以下。

       

      样本寄送

      样品名称简单、清晰、准确,填写好样品委托单后打印纸质版随样品一起邮寄。

      样品包装:建议样品用锡箔纸、离心管包装,使用油性记号笔填写样本编号,再装入自封袋中,避免样品包装破损样品散落。

      样品寄送:选择合适大小的泡沫盒,干冰用量1 天(5kg),2-3 天(10-20kg)3-5 天(20-30kg),并密封。

       

      材料样品处理与保存

       

      SMART建库

      Gateway、In-Gate建库

      取样注意事项

      RNA

      样品

      >2ug 

      >400ug 

      需要质量较好无降解的RNA。需要提供琼脂糖电泳检测胶图,能清晰的看到28S和18S两条带。

      植物组织(根茎叶种子)

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      (叶片/花/茎/种子)剪取适量新鲜新鲜样品;(根系)将根部泥土清洗干净后再将根系剪下来,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      植物组织(果实)

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>50g

      需要至少一份备份样品

      果实样品较大,如桃肉等,利用工具将果肉切成1-2cm块状大小,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      动物组织/昆虫

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      取适量的组织、昆虫样品,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      真菌

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      真菌为液培状态,离心收集去除上清,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻,真菌为平板菌状态,需要使用封口膜封好,泡沫固定在泡沫盒内,常温或冰袋寄送。

      动物细胞/ PBMC

      单个样品细胞>1*107 cfu

      需要至少一份备份样品

      单个样品细胞>1*108 cfu

      需要至少一份备份样品

      细胞:用PBS将细胞洗下来,600g转速离心,弃上清,收集细胞,将整个EP管置于液氮速冻。PBMC:尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离;体积为500-1000ul,使用无菌管保存,如果有抗凝剂最好加入抗凝剂,放-80℃保存。

       

      参考文献

    声明:本公司出售产品只能用于科研目的,不得用于诊断或者治疗!

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