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项目概述
细胞热迁移测定（cell ther mal shift assay, CETSA）技术是检测细胞内药物（配体）和蛋白质（靶标）相互作用的技术。是在活细胞水平（培养细胞、活体组织等）鉴定靶标的新方法，可检测细胞中可溶性蛋白的总量。广泛用于检测药物与蛋白在体外的互作，以及体外筛选特定蛋白的候选药物等方面。
实验原理
加热处理细胞时，随着温度的升高，蛋白质逐渐变性沉淀，有活性的可溶性蛋白量逐渐减少，通过生化分析手段如蛋白印迹杂交能够绘制出特定蛋白的可溶性蛋白含量随温度变化的曲线，即熔解曲线。对特定蛋白而言，可溶性蛋白量与变性蛋白量相等时的温度，或者可溶性蛋白量占总蛋白量一半时的温度，称为聚集温度（aggregation temperature），等同于熔解温度（Tm）。当细胞经药物处理后，药物和靶蛋白结合，使靶蛋白的热稳定性增强，Tm值增加，根据药物处理前后Tm的变化情况，确定靶蛋白和药物在生理水平上是否有相互作用。
实验目的
当蛋白质结合药物后，热稳定性会发生变化，通过测定这种变化去鉴定药物和蛋白之间的相互作用。
技术路线
实验流程
实验结果
图： Western blotting条带
图：数据统计
结果显示：与DMSO对照组相比，加入药物处理之后蛋白的热稳定性明显提高，熔解曲线表现出明显的右移，表明药物能够在细胞环境中直接与蛋白结合，且其热稳定性显著提高。
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