科研服务
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- 产品描述
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服务简介
亚细胞定位即指某种生物大分子物质或脂类在细胞内存在的具体位置。蛋白质在细胞质中经过翻译并合成，由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞结构中以参与细胞的各种生命活动，这一过程称为蛋白质亚细胞定位。蛋白质的功能、代谢以及相互作用等都与其亚细胞定位密切相关，成熟蛋白质必须在特定的亚细胞结构中才能发挥正常的生物学功能，如果定位发生偏差，将对细胞功能甚至生命产生重大影响，因此对蛋白质亚细胞定位的研究具有重要意义。
服务体系
烟草叶片、植物原生质体（烟草、玉米、拟南芥、水稻）、哺乳动物293T细胞
服务流程
烟草叶片体系
植物原生质体体系
动物体系
共定位marker
烟草叶片、植物原生质体体系
细胞器
Marker蛋白名称
参考文献
内质网
AtWAK2
Nelson BK et al,2007
高尔基体
AtXyIT
Pagny S et al,2003
液泡膜
At2g36830
Nelson BK et al,2007
过氧化物酶体
PTS1
Nelson BK et al,2007
细胞膜
AtPIP2a
Nelson BK et al,2007
细胞核
NbH2b
Romit Chakrabarty et al,2007
动物体系
细胞器
Marker蛋白名称
参考文献
细胞核
LEF1
Chaturvedi NK et al,2014
细胞膜
STOML3
Chaturvedi NK et al,2014
线粒体
MRPL15
Chaturvedi NK et al,2014
溶酶体
LGMN
Chaturvedi NK et al,2014
内质网
ASPH
Chaturvedi NK et al,2014
高尔基体
HS2ST1
Chaturvedi NK et al,2014
过氧化物酶体
ZADH2
Chaturvedi NK et al,2014
技术优势
1、定位清晰准确：可清晰区分细胞核、细胞质等亚细胞区域，经激光共聚焦显微镜成像，结果直观易判读；
2、适用场景丰富：可用于野生型蛋白、突变体蛋白、结构域截短体蛋白等不同类型靶标的亚细胞定位分析，兼容性强；
3、真实反映定位：真实反映目标蛋白在体内的定位分布，结果更贴合植物生长发育的真实生理场景，规避体外预测与软件分析的局限性；
4、服务体系完善：可进行亚细胞定位及亚细胞共定位技术服务；
5、 精准省心可靠：标准化实验体系，一站式技术服务，结果可靠，效率更高。
服务内容
烟草叶片、植物原生质体体系：
实验材料
材料名称
交付材料
1、 基因合成/载体构建
10个
1、重组质粒一份
2、重组质粒测序结果
3、实验原始图片
共定位：目的基因与空载对照各包含5张图片（1张目的蛋白荧光图、1张marker荧光图、1张目的蛋白+marker荧光图、1张Bright field、1张merge）；
普通定位：目的基因与空载对照各包含3张图片（1张目的蛋白荧光图、1张Bright field、1张merge）
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、转化
烟草叶片体系：农杆菌转化及PCR阳性验证、植株种植及农杆菌瞬时转化植株
原生质体转化系统：质粒大抽、原生质体制备及转化
17个
3、Confocol观察拍照
4、 数据结果整理
3个
动物体系
实验材料
材料名称
交付材料
1、基因合成/载体构建
15个
1、基因合成报告；测序验证报告；剩余表达质粒；
2、实验原始图片，交付3个视野
共定位：每个视野包含4张图（marker、目的蛋白各1张荧光图、1张Bright field、1张merge）；
普通定位：每个视野包含3张图（1张目的蛋白荧光图、1张Bright field、1张merge）；
3、标准实验报告(含实验步骤、流程)；
2、细胞转染
细胞传代、铺板；细胞转染；瞬时表达
5个
3、激光共聚焦拍摄
细胞固定；荧光拍摄
5个
案例展示
植物烟草叶片体系亚细胞定位示例图（A蛋白可能定位于细胞核）
烟草原生质体体系亚细胞定位示例图（A蛋白可能定位于细胞核）
水稻原生质体体系亚细胞定位示例图（A蛋白可能定位于细胞核、细胞膜、细胞质）
拟南芥原生质体体系亚细胞定位示例图（A蛋白可能定位于细胞核）
玉米原生质体体系亚细胞定位示例图（A蛋白可能定位于细胞核）
参考文献
[1] Chaturvedi NK, Mir RA, Band V, et al. Experimental validation of predicted subcellular localizations of human proteins. BMC Res Notes. 2014 Dec 15;7:912.
[2] Nelson BK, Cai X, Nebenführ A. A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants. Plant J. 2007 Sep;51(6):1126-36.
[3] Pagny S, Bouissonnie F, Sarkar M, et al. Structural requirements for Arabidopsis beta1,2-xylosyltransferase activity and targeting to the Golgi. Plant J. 2003 Jan;33(1):189-203.
[4] Chakrabarty R, Banerjee R, Chung SM, et al. PSITE vectors for stable integration or transient expression of autofluorescent protein fusions in plants: probing Nicotiana benthamiana-virus interactions. Mol Plant Microbe Interact. 2007 Jul;20(7):740-50.
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