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亚细胞定位

亚细胞定位即指某种生物大分子物质或脂类在细胞内存在的具体位置。蛋白质在细胞质中经过翻译并合成，由蛋白质分选信号引导而被转运到特定的亚细胞结构中以参与细胞的各种生命活动，这一过程称为蛋白质亚细胞定位。蛋白质的功能、代谢以及相互作用等都与其亚细胞定位密切相关，成熟蛋白质必须在特定的亚细胞结构中才能发挥正常的生物学功能，如果定位发生偏差，将对细胞功能甚至生命产生重大影响，因此对蛋白质亚细胞定位的研究具有重要意义。

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产品描述

服务简介

服务流程

植物：

动物

共定位marker

动物亚细胞定位可选marker一览表

细胞器	marker蛋白名称	参考文献
细胞核	LEF1	Chaturvedi NK et al,2014
细胞膜	STOML3	Chaturvedi NK et al,2014
线粒体	MRPL15	Chaturvedi NK et al,2014
溶酶体	LGMN	Chaturvedi NK et al,2014
内质网	ASPH	Chaturvedi NK et al,2014
高尔基体	HS2ST1	Chaturvedi NK et al,2014
过氧化物酶体	ZADH2	Chaturvedi NK et al,2014

植物亚细胞定位可选marker一览表

细胞器	marker蛋白名称	参考文献
内质网	AtWAK2	Nelson BK et al,2007
高尔基体	AtXyIT	Pagny S et al,2003
液泡膜	At2g36830	Nelson BK et al,2007
过氧化物酶体	PTS1	Nelson BK et al,2007
线粒体	ScCoX4	Nelson BK et al,2007
质体	LOC107766567	Nelson BK et al,2007
细胞膜	AtPIP2a	Nelson BK et al,2007
细胞核	NbH2b	Romit Chakrabarty et al,2007

技术优势

技术路线成熟：可进行亚细胞定位及亚细胞共定位技术服务，基于高精度亚细胞共定位分析平台，高效辅助蛋白质之间的相互作用机制和基因功能研究

服务体系广泛：可利用烟草叶片，原生质体（烟草、拟南芥、水稻）和哺乳动物293T细胞等转化系统，系统性地为客户提供从质粒载体构建、动植物亚细胞定位、蛋白互作分析、功能验证等定制化技术服务

实验标准严谨：实验全流程的技术可靠性与数据可重复性，支持输出SCI期刊规范处理图片

应用范围

确定蛋白质这类生物大分子的胞内定位，从而有助于推测其可能参与的生物学过程和功能，应用于蛋白质功能研究、作物遗传改良、药物靶点研究、疾病机制探索等研究领域

样本要求

类型	送样标准	运输条件
需要基因合成的序列	无	无
构建好的质粒中间载体质粒	浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。	冰袋
含构建好质粒的菌液含中间载体质粒的菌液	体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌	无污染	常温

服务范围及交付标准

以烟草作为实验材料时：

类别	服务内容	服务周期（工作日）	交付材料
烟草系统亚细胞定位	1、基因合成/载体构建 ☐基因合成（密码子优化） ☐基因合成（密码子不优化） ☐载体构建基因构建至pBinGFP2/ pCAMBIA1300-mcherry-Flag	10个	1、重组质粒一份 2、重组质粒测序结果 3、实验原始图片，共定位目的基因与空载对照各包含5张图片（1张目的蛋白荧光图、1张marker荧光图、1张目的蛋白+marker荧光图、1张Bright field、1张merge）、普通定位目的基因与空载对照各包含3张图片（1张目的蛋白荧光图、1张Bright field、1张merge） 4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
	2、烟草叶片转化系统（1）农杆菌转化及PCR阳性验证（2）植株种植及农杆菌瞬时转化植株	17个
	3、结果观察拍照与分析（1）Confocol观察拍照（2）数据结果整理	3个

以原生质体作为实验材料时：

类别	服务内容	服务周期（工作日）	交付材料
原生质体系统亚细胞定位	1、基因合成/载体构建 ☐基因合成（密码子优化） ☐基因合成（密码子不优化） ☐载体构建基因构建至PUC19-35s-EGFP	10个	1、重组质粒一份 2、重组质粒测序结果 3、实验原始图片，共定位目的基因与空载对照各包含5张图片（1张目的蛋白荧光图、1张marker荧光图、1张目的蛋白+marker荧光图、1张Bright field、1张merge）、普通定位目的基因与空载对照各包含3张图片（1张目的蛋白荧光图、1张Bright field、1张merge） 4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
	2、质粒提取 3、（可选）原生质体转化系统 ☐水稻原生质体转化系统 ☐拟南芥原生质体转化系统 ☐烟草原生质体转化系统	17个
	4、结果观察拍照与分析（1）Confocol观察拍照（2）数据结果整理	3个

以哺乳动物293T细胞作为实验材料时：

类别	服务内容	服务周期（工作日）	交付材料
293T细胞亚细胞定位	1、载体构建工作 A、基因优化及基因合成 B、亚克隆至表达载体中	15个	1、结题报告以及全部原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等） 2、返还目的基因剩余质粒 3、交付3个视野，每个视野包含marker和目的蛋白的2张荧光图，1张Bright field，1张merge，共4张图
	2、细胞转染 A、细胞传代、铺板 B、细胞转染 C、瞬时表达	5个
	3、结果观察拍照与分析 A、细胞固定 B、荧光拍摄 C、梳理分析数据	4个

案例展示

植物烟草叶片体系亚细胞定位示例图（A蛋白定位于细胞核）

植物拟南芥原生质体体系亚细胞定位示例图（Gene蛋白定位于细胞核）

哺乳动物293T细胞亚细胞定位示例图（目的蛋白可能在细胞膜中有定位）

参考文献

[1] Chaturvedi NK, Mir RA, Band V, et al. Experimental validation of predicted subcellular localizations of human proteins. BMC Res Notes. 2014 Dec 15;7:912.

[2] Nelson BK, Cai X, Nebenführ A. A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants. Plant J. 2007 Sep;51(6):1126-36.

[3] Pagny S, Bouissonnie F, Sarkar M, et al. Structural requirements for Arabidopsis beta1,2-xylosyltransferase activity and targeting to the Golgi. Plant J. 2003 Jan;33(1):189-203.

[4] Chakrabarty R, Banerjee R, Chung SM, et al. PSITE vectors for stable integration or transient expression of autofluorescent protein fusions in plants: probing Nicotiana benthamiana-virus interactions. Mol Plant Microbe Interact. 2007 Jul;20(7):740-50.

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