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- 产品描述
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服务简介
荧光素酶互补（LCA）是一种用来研究蛋白质之间的相互作用，将荧光素酶分为N端和C端两个部分，分别与不同的蛋白连接，在蛋白之间存在互作的情况下形成完整的荧光素酶，因此可以通过观察荧光信号来评估蛋白质之间的相互作用。
技术原理
将萤火虫荧光素酶蛋白分成NLuc和CLuc两个片段，分别连接两个待测目标蛋白，当两个目标蛋白相互作用时，荧光素酶的两个片段在空间上靠近并重新组合成完整的荧光素酶，发挥荧光素酶活性从而催化荧光素产生荧光。
技术优势
1、灵敏度高、实验结果可定性也可定量
2、添加阴阳性对照确保实验体系及流程可靠性
3、可提供多种蛋白互作方法进行进一步验证
实验流程
材料样品处理与保存
类型
送样标准
运输条件
需要基因合成的序列
无
无
构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋
含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。
干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌
无污染
常温
服务内容
服务流程
工作日
交付材料
1、基因合成/载体构建 10个
1、重组质粒一份
2、重组质粒测序结果
3、实验原始图片，每片叶子做5组，包含实验组1个、阳性对照1个、阴性对照3个，
设3次生物学重复，交付3片叶子照片
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、烟草注射
3、荧光素酶活性观察
10个
4、定量分析
5、数据整理
5个
合计 25个
案例报告
为了检测两组蛋白A与B是否互作，分别用活体成像仪与酶标仪定性与定量分析，从图中可以看出，两组实验组发出强烈的荧光，甚至A与B比阳性对照更强，而其余的阴性对照则不发光，表明A与B互作（图1 A）。另外，酶标仪测定结果，实验组萤火素酶活性远远高于阴性对照组，A与B比阳性对照略高，定量数据证明A与B是互作的（图1 B）。
图1 蛋白互作结果
A. 活体成像仪观察A与B互作的结果。B. 酶标仪测定A与B互作的定量数据。
常见问题及解答
Q1 实验中检测到的荧光信号较弱怎么办？
确保载体正确构建，蛋白正确表达；提高转染效率，提高底物浓度
Q2 如何提高实验准确性
多设重复，对照组与实验组注射同一叶片，保证相同的生长背景；同种菌液注射3-5枚叶片作为重复；设置阴性及阳性对照，检测背景值；减少非特异性结合，比如调整洗涤条件或使用适当的封闭试剂；避免细胞裂解导致的内源性荧光素酶泄露；
参考文献
1、Zhu F, Wang K, Li D, Liu Z, Li M, Wang Z, Li X, Lan X, Guan Q. OsSAP6 Positively Regulates Soda Saline-Alkaline Stress Tolerance in Rice. Rice (N Y). 2022 Dec 27;15(1):69. doi: 10.1186/s12284-022-00616-x. PMID: 36574073; PMCID: PMC9794665.
2、Yu H, Wang Q, Zhang Z, Wu T, Yang X, Zhu X, Ye Y, Leng J, Yang S, Feng X. Genetic Mapping of the Gmpgl3 Mutant Reveals the Function of GmTic110a in Soybean Chloroplast Development. Front Plant Sci. 2022 May 26;13:892077. doi: 10.3389/fpls.2022.892077. PMID: 35693168; PMCID: PMC9178232.
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