免疫共沉淀Co-IP

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。与其他蛋白互作研究技术，比如酵母双杂、Pull-down等各有优势，其中Co-IP基于抗原和抗体之间结合，可以从复杂的细胞裂解液中特异性地分离和鉴定蛋白质复合体，对于理解蛋白质如何在细胞内相互作用以及它们如何影响细胞功能和信号传导至关重要。

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产品描述

服务介绍

Co-IP（免疫共沉淀，Co- Immunoprecipitation）是一种用于研究蛋白质相互作用的技术，它能够特异性地富集目标蛋白及其互作的蛋白或蛋白复合体。Co-IP技术使用特定蛋白质的抗体进行免疫沉淀，可以将与目标结合的其余蛋白质一同沉淀下来，形成抗体-靶蛋白复合物，进行SDS-PAGE进行分析、Western blot检测或质谱分析。细胞在非变性条件下裂解，因而可保留细胞内蛋白质-蛋白质间的相互作用。

技术原理

基于特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用，利用蛋白的特异性抗体对目标蛋白进行免疫沉淀，与目标蛋白能结合的候选蛋白也会被一同沉淀下来，通过SDS-PAGE进行分析、Western blot是否能检测到候选蛋白，验证蛋白互作。

技术优势
1、从细胞转染开始，每一节点严格监控
2、不仅可以用于验证已知的相互作用的蛋白，还可以用于寻找能与目的蛋白相互作用的未知的蛋白质分子
3、可以检测更接近生理状态下的相互作用蛋白，同时可提供多种蛋白互作方法进行进一步验证
4、结合生信技术预测蛋白功能，揭示蛋白的生物学意义

实验流程

1、载体构建及转化
烟草体系：

动物细胞体系：

2、总蛋白提取及表达分析

3、免疫共沉淀

4、Western blot

烟草体系：

动物细胞体系：

应用场景

可以用于两种目标蛋白是否体内互作的检测

适用于分离得到自然状态下相互作用的蛋白复合物

样品接受标准

植物：

类型	送样标准	运输条件
需要基因合成的序列	无	无
构建好的质粒中间载体质粒	浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。	冰袋
含构建好质粒的菌液含中间载体质粒的菌液	体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌	无污染	常温
注射好的烟草叶片	样品≥三片	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
总蛋白样品	体积>500ul。	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
抗体	IP级别抗体>30uL	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）

动物：

类型	送样标准	运输条件
需要基因合成的序列	无	无
构建好的质粒中间载体质粒	去内毒，浓度>500ng/uL，质量>30ug；提供载体序列和抗性，无污染。	冰袋
含构建好质粒的菌液含中间载体质粒的菌液	体积>500uL；提供载体序列和抗性，无污染。	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌	无污染	常温
转染后细胞	3×107个细胞/组（约3个10cm皿）	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
含有诱饵蛋白及目标蛋白的裂解液	>5mL	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
抗体	IP级别抗体>30uL	干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）