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瑞源生物
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- 产品描述
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服务介绍
Co-IP（免疫共沉淀，Co- Immunoprecipitation）是一种用于研究蛋白质相互作用的技术，它能够特异性地富集目标蛋白及其互作的蛋白或蛋白复合体。Co-IP技术使用特定蛋白质的抗体进行免疫沉淀，可以将与目标结合的其余蛋白质一同沉淀下来，形成抗体-靶蛋白复合物，进行SDS-PAGE进行分析、Western blot检测或质谱分析。细胞在非变性条件下裂解，因而可保留细胞内蛋白质-蛋白质间的相互作用。
技术原理
基于特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用，利用蛋白的特异性抗体对目标蛋白进行免疫沉淀，与目标蛋白能结合的候选蛋白也会被一同沉淀下来，通过SDS-PAGE进行分析、Western blot是否能检测到候选蛋白，验证蛋白互作。
实验流程
1、载体构建及转化
烟草叶片体系
植物原生质体体系
2、总蛋白提取及表达分析
3、免疫共沉淀
4、Western blot
烟草体系
图 A 与 B 在烟草中的互作情况
植物原生质体体系
图 A与B在水稻原生质体中的互作情况
优势
1、 体内原生环境：烟草、植物原生质体体系均保留完整胞内生理环境，真实还原蛋白体内结合状态；
2、周期短：无需稳定遗传转化，瞬转后可快速开展实验；
3、多标签兼容：支持GFP/MYC/FLAG/HA多标签组合共沉淀，可双向互作验证，降低假阳性；
4、低背景结合：专用标签琼脂糖珠特异性强，非特异性杂带少，WB 结果清晰易判读；
5、物种适配成熟：原生质体、烟草体系可供选择，体系经梯度优化后稳定成熟；
6、一站式配套服务：可联合Y2H、BiFC、LCA及Pull down实验，提供完整蛋白互作研究方案；
7、售前售后技术支持：实验报告附带结果解读，免费设计实验方案，免费技术答疑。
应用场景
1、已知蛋白互作验证：验证两个已知蛋白在生理条件下的体内相互作用；
2、与质谱联用筛选与特定蛋白相互作用的未知蛋白；
3、分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
收样标准
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/μL，体积>20 μL；提供载体序列和抗性，无污染。 冰袋 含构建好质粒的大肠菌液
含中间载体质粒的大肠菌液
体积>500 μL；提供载体序列和抗性，无污染。 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 大肠平板菌 无污染 常温 抗体 IP级别抗体>30 μL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 总蛋白样品 >0.5 mL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 转化后的植物材料 >5 g 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30 kg） 服务内容
植物（烟草）体系
服务内容 周期 交付材料 1、基因合成/载体构建 15天 1、重组质粒一份
2、重组质粒基因合成报告/载体构建测序结果
3、实验原始图片，GFP、FLAG标签WB鉴定结果各一张（包含Input、IP各两个泳道，对照组默认为加GFP空载。如果使用其他标签对照会做相应修改。）
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、农杆菌转化、鉴定
3、烟草注射
4、表达分析鉴定
10天 5、免疫沉淀
6、Western Blot验证
10天 植物原生质体体系
服务内容 周期 交付材料 1、基因合成/载体构建 15天 1、重组质粒一份
2、重组质粒基因合成报告/载体构建测序结果
3、实验原始图片，GFP、FLAG标签WB鉴定结果各一张（包含Input、IP各两个泳道，对照组默认为加GFP空载。如果使用其他标签对照会做相应修改。）
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、原生质体转化系统
1）质粒大抽
2）原生质体制备及转化
10天 3、免疫沉淀
1）总蛋白提取
2）IP
3）WB鉴定
10天 常见问题及解答
1、用Co-IP验证出两个蛋白互作，但是其他验证方式却不互作？
因为Co-IP不能判断蛋白间是否为直接互作，可能有第三个蛋白参与了两蛋白间的互作，导致其他检测方法不能检测到互作。
2、IP 和 Co-IP有什么区别？
IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下，直接用这种抗体将目标蛋白质提取出来，是一种提纯蛋白质的方法。
免疫共沉淀（Co-IP）实验主要用于检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。
案例展示
图1 A与B在烟草中的互作情况
图2 A与B在水稻原生质体中的互作情况
图3 A与B在玉米原生质体中的互作情况
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