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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP），是一种利用抗体-抗原特异性识别，从细胞裂解液中捕获目标蛋白及其相互作用蛋白的技术，用于研究蛋白质-蛋白质间的天然相互作用。
服务优势
1、保持天然构象：在非变性条件下进行，能够保留蛋白质复合物的天然构象和相互作用，更接近生理状态。
2、捕获内源性复合物：可以直接从细胞裂解液中富集目标蛋白及其生理互作伙伴，无需重组表达。
3、鉴定未知互作蛋白：结合质谱（MS）技术，可以鉴定未知的相互作用蛋白，发现新的互作网络。
4、兼容多种检测方式：洗脱的复合物既可通过Western Blot验证已知互作蛋白，也可通过质谱进行高通量鉴定。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、载体构建工作
A、基因合成
B、载体构建
15个 1、原始数据、结果图片；
2、标准实验报告(含实验步骤、流程)；
3、含有目的基因的质粒及测序报告。
2、表达鉴定
A、细胞培养B、细胞转染
C、表达分析鉴定（WB）
15个 3、Co-IP
A、免疫沉淀B、Western Blot验证
15个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells），提供细胞名称和培养方式 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
菌液 提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 抗体 提供稀释比例、种属、反应性、抗体体积>20 uL 抗体可使用冰袋运输，避免使用干冰，使用密封性较好的离心管，封口膜密封寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
1、免疫共沉淀：A与B两种蛋白互作。
图1 IP结果的WB检测图
Co-IP vs 其他技术
技术 用途 优点 缺点 Co-IP 天然互作验证 保持天然构象，可捕获复合物 可能捕获间接互作；弱互作易丢失 GST pull-down 体外验证直接互作 确定直接结合 非天然环境，假阳性 BiFC 活细胞互作定位 活细胞，亚细胞定位 不可逆，片段组装可能干扰 Co-IP实验常见问题、原因及解决方案
1、Western Blot无目的条带
可能原因：裂解液中诱饵蛋白未释放或发生降解。
解决方案：检查裂解液成分，添加新鲜蛋白酶抑制剂；采用超声辅助裂解。
2、背景条带多
可能原因：非特异性结合。
解决方案：增加洗涤次数或提高洗涤液盐浓度；延长预清除时间。
3、靶蛋白条带正常，互作蛋白无信号
可能原因：蛋白间相互作用较弱或为瞬时结合；裂解液条件破坏了互作复合物。
解决方案：改用更温和的裂解液；添加化学交联剂（如DSS）稳定互作；延长抗体孵育时间。
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
