体外细胞模型构建&细胞功能检测

体外细胞模型构建是细胞生物学研究的基础技术环节，在体外建立模拟特定生理或病理状态的细胞体系。完成模型构建后，继而进行细胞功能检测，以全面评估模型的生物学特征。

所属分类

体外模型构建&细胞功能检测

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产品描述

一、体外细胞模型构建

服务简介

本服务提供多种体外细胞应激/损伤模型的标准化构建，用于模拟疾病发生的关键病理过程或研究特定刺激对细胞的影响。针对客户需求，采用基础诱导剂直接处理法，构建经典细胞模型：氧化应激模型/炎症反应模型/细胞衰老模型/高糖损伤模型。这些模型适用于药物保护作用筛选、毒性评价及机制研究。

实验原理

1、氧化应激模型是利用过氧化氢（H₂O₂）等氧化剂直接处理细胞，产生过量活性氧（ROS），破坏细胞内氧化还原平衡，模拟机体或特定组织在病理状态下的氧化损伤过程。

2、炎症反应模型是使用脂多糖（LPS）等促炎因子刺激免疫细胞或特定靶细胞（如内皮细胞、神经元），激活炎症信号通路，诱导促炎因子大量表达，模拟体内炎症环境。

3、细胞衰老模型是采用阿霉素（Dox）等基因毒性药物或高浓度H₂O₂处理细胞，诱导DNA损伤，不可逆地激活p53/p21和p16/Rb等衰老相关通路，使细胞进入稳定的生长停滞状态，模拟体内衰老或治疗诱导的衰老。

4、高糖损伤模型是使用高浓度葡萄糖培养基长时间培养细胞，模拟糖尿病慢性高血糖环境，导致晚期糖基化终末产物（AGEs）积累、ROS升高、炎症激活等病理变化。

服务优势

1、模型可定制

2、操作灵活

3、可模拟疾病或处理状态

4、便于机制研究

案例报告

如图所示，在对照组中细胞呈圆形或椭圆形，贴壁良好、形态舒展、折光性均一、轮廓清晰，而经过诱导剂处理之后，细胞质浓缩，细胞整体体积显著缩小，细胞膜表面会向外凸起，整个细胞会碎裂成多个大小不等、膜完整的、圆形的碎片。为对凋亡细胞进行定量，我们采用Annexin V-FITC/PI双染法进行流式细胞术分析，随着诱导剂浓度的增加，凋亡细胞比例不断增加。综合上述形态学和定量分析结果，我们成功构建了细胞凋亡模型。结果如下（图 1、2）：

图1 细胞形态显微镜下图片

doi: 10.3980/j.issn.2222-3959.2013.06.05

A：对照，4h; B：20g/L，4h; C：10g/L，4h; D：5g/L，4h; E：对照，16h; F：2.5g/L，16h; G：1.25g/L，16h; H：0.625g/L，16h; I：对照，24h; J：0.3125g/L，24h; K：0.15625g/L，24h; L：0.078125g/L，24h; M：对照，28h; N：0.3125g/L，28h; O：0.15625g/L，28h; P：0.078125g/L，28h

图2 细胞凋亡结果图

doi: 10.3980/j.issn.2222-3959.2013.06.05

二、细胞功能检测

本平台提供以下核心细胞功能检测服务：

1、IC50检测：梯度浓度药物处理细胞，测定细胞活力并拟合剂量-效应曲线，计算半数抑制浓度，评估药物敏感性或毒性。

2、细胞凋亡检测：标记早期凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸或DNA断裂末端，流式或荧光成像定量凋亡率。

3、细胞迁移检测：单层细胞划痕后实时监测划痕愈合速度，反映细胞横向迁移能力。

4、细胞侵袭检测：Matrigel基质胶铺膜模拟胞外基质屏障，细胞需降解基质并穿过微孔膜，评估其侵袭潜能。

5、细胞周期检测：PI与DNA化学计量结合，流式细胞仪测定DNA含量直方图，区分G0/G1、S、G2/M各时相分布。

6、活性氧ROS检测：荧光探针进入细胞后被氧化发出荧光，荧光强度反映胞内ROS水平，评估氧化应激状态。

服务内容

服务内容	自然日	交付材料
购买细胞	/个	1、所有实验涉及采购细胞、试剂盒； 2、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）； 3、实验检测图片与结果分析； 4、具体实验报告。
细胞复苏与常规培养	10个
体外细胞模型构建 ①炎症模型（LPS诱导） ②氧化应激模型（H2O2诱导） ③衰老模型（阿霉素诱导） ④高糖模型（高浓度葡萄糖诱导）	15个
关键细胞功能检测 ①IC50检测（CCK8/MTT） ②细胞凋亡检测（Annexin V/PI双染法/ TUNEL染色） ③细胞迁移检测（划痕实验） ④细胞侵袭检测（Transwell实验） ⑤细胞周期检测（PI染色法） ⑥活性氧ROS检测（DCFH-DA荧光探针法）	15个

送样标准

类型	送样标准	运输条件
细胞	T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×10⁶ cells），提供细胞名称和培养方式	1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。 2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
化合物	>5 mg，提供分子量	固体粉末最稳定，在室温下密封运输即可，对于温度敏感的化合物，可使用冰袋或者干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
注意： 1、送样时避免使用含酚红培养基（干扰荧光信号）。 2、保存及运输：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。