细胞热迁移（CETSA）

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产品描述

服务简介

细胞热迁移测定（cell thermal shift assay，CETSA）技术是检测细胞内药物（配体）和蛋白质（靶标）相互作用的技术。CETSA技术是在活细胞水平（培养细胞、活体组织等）鉴定靶标的新方法，可检测细胞中可溶性蛋白的总量。在CETSA测定中，蛋白质与药物化合物的反应是在蛋白质保持正确的亚细胞定位、翻译后修饰、代谢物反馈等条件下进行的，是一种更加可信的药物靶标筛选方法。

实验原理

加热处理细胞时，随着温度的升高，蛋白质逐渐变性沉淀，有活性的可溶性蛋白量逐渐减少，通过生化分析手段如蛋白印迹杂交就能够绘制出特定蛋白的可溶性蛋白含量随温度变化的曲线，即熔解曲线。对特定蛋白而言，可溶性蛋白量与变性蛋白量相等时的温度，或者可溶性蛋白量占总蛋白量一半时的温度，称为聚集温度（aggregation temperature），等同于熔解温度（Tm）。当细胞经药物处理后，药物和靶蛋白结合，使靶蛋白的热稳定性增强，Tm 值增加，根据药物处理前后 Tm 的变化情况，就可以确定靶蛋白和药物在生理水平上是否有相互作用。

技术路线

应用场景

1、验证小分子药物是否与目标蛋白结合。

2、比较不同候选化合物靶标结合强弱。

3、研究突变体/野生型蛋白的热稳定性差异。

4、分析药物处理前后靶标占有率变化。

服务优势

1、无需对化合物进行荧光或放射标记。

2、可直接反应靶标结合和占有情况。

3、可衔接WB、qPcR相关验证或质谱拓展分析。

服务内容

服务内容

自然日

交付材料

细胞

A、细胞培养

B、药物处理及蛋白提取

C、WB考染、检测

细胞裂解液（必须保持蛋白活力）

A、药物处理及蛋白提取

B、WB考染、检测

35个

1、WB及考马斯蓝染色检测数据结果图片；

2、灰度值结果及Graphpad Prism数据处理图；

3、CETSA标准实验报告（含实验步骤、流程）。

收样标准

类型	送样标准	运输条件
细胞（需我司培养）	T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×10⁶ cells），提供细胞名称和培养方式	1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器>90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。 2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
细胞沉淀	≥2个T75	细胞消化后用PBS清洗2-3遍，离心去除上清，液氮速溶8-10 min，干冰寄送。
裂解液	裂解液体积>2 mL	裂解液必须干冰运输，避免反复冻融，使用密封性较好的离心管，管内预留至少20%体积，封口膜密封寄送
动物组织	重量>30 mg	组织样本需液氮速冻后用干冰寄送；干冰使用量： 1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
抗体	提供稀释比例、种属、反应性、抗体体积>20 uL	抗体可使用冰袋运输，避免使用干冰，使用密封性较好的离心管，封口膜密封寄送
化合物	>5 mg，提供分子量	固体粉末最稳定，在室温下密封运输即可，对于温度敏感的化合物，可使用冰袋或者干冰寄送
注意： 1、送样需求：这里列出的均为每组样本的送样量，如果实验和对照组用的样本一致，此样本量*2；若寄送细胞裂解液时样本浓度不足可能导致实验失败，需按重复数加倍送样（如3次重复×1.5 mL = 4.5 mL）。 2、保存及运输：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。