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酵母膜系统双杂交文库筛选及验证
立足于生命科学,为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务
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酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸 - 蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别 DNA 结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析 DNA 结合结构域信息等。
酵母文库构建(SMART 技术)
SMART 技术是由 Clontech 于 1996 年开发的,SMART 技术的名称来源于 switching mechanism at 5’ end of RNA template 的缩写,最初用于构建哺乳动物 cDNA 文库,后来也用于构建酵母 cDNA 文库。SMART 技术的原理是利用反转录酶的模板切换活性,将特异性的序列加到 cDNA 的 5’端,从而提高全长克隆的效率。
酵母文库构建(Gateway 技术)
Gateway 技术是由 Invitrogen 于 1999 年开发的,最初用于构建无限制性酶切位点的克隆载体,后来也用于构建酵母文库。Gateway 技术的原理是利用细菌噬菌体 λ 的重组系统,将特异性的重组序列加到 DNA 片段的两端,从而实现不同载体间的 DNA 转移
酵母反向单杂交技术服务(TF-Centered Y1H)
基于酵母单杂交技术建立了一种以转录因子为中心鉴定其识别作用元件的技术,命名为TF- centered Y1H。该技术能够准确、快速简捷、高效的鉴定出转录因子识别的元件,在蛋白质与DNA元件的互作研究中有着广阔的应用前景。
酵母逆境基因筛选及验证
酵母高通量抗逆基因筛选服务能够快速筛选岀非模式抗逆物种资源中的多重逆境抗性相关的大量基因,利用酵母菌,在逆境筛选系统下,通过抗性梯度实验对基因组范围内的抗性相关基因进行筛查,利用蛋白组学寻找候选蛋白,进行蛋白水平上的表型验证。
Pull down MS是用于研究蛋白质与DNA或其他蛋白质之间相互作用的两种技术的组合: Pull down(下拉):利用一种“诱饵”分子从复杂的生物样品(如细胞裂解液)中特异性地“钓出”与其直接或间接相互作用的“猎物”分子。 MS(质谱分析):使用质谱技术对钓取的“猎物”进行定性和定量分析,从而发现新的相互作用蛋白。
酵母文库构建是一项将外源DNA片段(如cDNA、基因组DNA或人工设计的序列)高效插入酵母表达载体,并转化进酵母细胞群体,形成大规模克隆集合的核心技术。该文库可用于高通量筛选目标基因或研究基因功能。瑞源生物可提供以下三种建库方法:In-Gate技术、SMART技术、Gateway技术。
转录因子文库是一种包含了多种转录因子的集合,通过收集一系列转录因子的开放阅读框(ORF)克隆,这些克隆是通过各种遗传学和分子生物学技术获得的cDNA。有了转录因子文库可以直接将转录因子基因构建于载体中,便于进行下一步的筛选。
免疫沉淀-质谱分析技术服务(IP-MS)
免疫沉淀-质谱分析技术(IP-MS)是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化,将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离,再通过与质谱联用,对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。
Cre-LoxP原理的大规模蛋白互作筛选技术,这是一种以酵母双杂筛库体系为基础,用来筛选蛋白质相互作用的高通量方法。
酵母文库构建(In-Gate 技术)
南京瑞源生物在基于经典SMART、gateway文库构建的方法基础上,通过自主研发优化载体和实验流程,不进行BP反应,并且基因完整性和准确性高于传统gateway方法。
泛素作为降解信号分子,可以连接另外一种蛋白质的N端,然后被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。在膜双杂体系中泛素被分为两部分:N端(Nub),C端(Cub)。泛素Nub的3位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI突变为NubG)。