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瑞源生物
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- 产品描述
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服务简介
免疫沉淀-质谱分析技术（IP-MS）是一种基于抗体和抗原特异性结合的原理研究蛋白间互作的技术。通过能与目的蛋白结合的磁珠孵化，将能与目的蛋白结合的蛋白与其他蛋白组分分离，再通过与质谱联用，对这些分离出来的蛋白组分进行定性鉴定。
技术原理
IP-MS 通过使用与目的蛋白或融合标签特异结合的磁珠（如抗标签抗体磁珠、链霉亲和素磁珠、Ni-NTA 磁珠或 GST 磁珠等）。将磁珠加入样本裂解液后，磁珠表面的捕获配体可特异性识别并结合目的蛋白或标签，同时将与目的蛋白结合的相互作用蛋白一起捕获，形成"磁珠–捕获配体–目的蛋白/标签–相互作用蛋白"复合物。洗涤去除非特异性结合蛋白后，洗脱富集产物并进行质谱检测，即可鉴定与目的蛋白相互作用的蛋白。
技术优势
1、体系覆盖烟草/植物组织与原生质体，满足蛋白鉴定需求；
2、不仅可以验证已知的互作蛋白，还可用于寻找与目的蛋白互作的未知蛋白；
3、可以检测更接近生理状态下的相互作用蛋白；
4、专用标签琼脂糖珠特异性强，非特异性杂带少，结果清晰易判读；
5、体内原生环境，真实还原蛋白体内结合状态；
6、原生质体体系无需稳定遗传转化，适配物种丰富。
实验流程
送样标准
类型 送样标准 运输条件 二选一
（需要提供转染后的材料，烟草无需客户提供）
转化后的植物材料/原生质体 植物材料>5 g
原生质体>107
干冰寄送
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
总蛋白样品 >1 mL 干冰寄送
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
四选一
（需要我司转烟草/原生质体，若已提供转染后的材料不需要提供）
需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/μL，体积>20 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的大肠菌液
含中间载体质粒的大肠菌液
体积>500 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 大肠平板菌 无污染 常温 常见标签抗体无需提供 抗体 IP级别抗体>30 uL 干冰寄送
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
注意：
1、其余类型样品请提前与我司沟通；
2、干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、基因合成/载体构建 15个 1、原始数据、结果图片
2、标准实验报告(含实验步骤、流程)
3、含有目的基因的质粒及测序报告
2、
烟草瞬时表达：
A、农杆菌转化
B、阳性克隆鉴定
C、植物瞬时表达
原生质体转化：
A、质粒大抽
B、原生质体制备与转化
10个 3、IP：
A、提取总蛋白
B、磁珠与总蛋白孵育
C、蛋白纯化
D、WB鉴定
5个 4、LC-MS质谱分析 24个 案例展示
图1 WB鉴定结果
A Input鉴定，M：Marker；1：GFP-A，2：GFP；B IP鉴定，M：Marker；1：GFP-A，2：GFP
图2 转录因子注释结果条形图
图3 groupvs组所有差异蛋白质的KEGG通路富集气泡图(Top20)
常见问题及解答
Q：IP-MS筛选出的互作蛋白，如何进行验证？
候选蛋白互作可分别通过体内和体外实验进行验证。体内验证可选择 Co-IP、酵母双杂交、LCA 和 BiFC：其中 Co-IP 用于捕获天然或近生理状态下的互作复合物，酵母双杂交用于检测细胞内蛋白互作，LCA 和 BiFC 可用于细胞内互作的可视化/数量化验证。体外验证可选择 Pull-down，直接检测纯化或重组蛋白之间的结合。进一步结合数字化蛋白互作位点分析，还可确定两个互作蛋白的具体相互作用位点。
Q：IP-MS对抗体有何要求
需提供IP级别的抗体
Q：IP-MS相比于其他的互作检测实验有何优势
不仅可以用于验证已知的相互作用的蛋白，还可以用于寻找能与目的蛋白相互作用的未知的蛋白质分子。同时由于实验为体内实验，可以找到最接近生理状态下的蛋白互作。
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