科研服务
立足于生命科学，为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务
瑞源医学
相关产品
- 产品描述
-
服务简介
将荧光素酶蛋白在特定位置分割为两个无独立活性的片段（N端片段和C端片段），分别与待研究的两个目标蛋白A和B融合表达。当蛋白A和B发生特异性相互作用时，两个荧光素酶片段在空间上相互靠近，重新折叠形成具有催化活性的酶结构，在加入相应底物后催化产生生物发光信号。发光强度与蛋白互作强度呈正相关，可通过化学发光检测仪定量分析。
服务优势
1、检测信号强，信噪比高。
2、定量能力强，发光信号与互作强度呈良好线性相关。
3、适合活细胞检测，反映真实的互作状态。
4、本底信号低，结果直观，易于判断与解释。
5、可高通量比较不同条件、突变体、药物处理下的互作变化。
6、样本适用性广：覆盖多种哺乳动物细胞及组织样本。
应用场景
1、验证候选蛋白互作。
2、分析突变体/结构域缺失体对互作强度的影响。
3、比较药物、刺激、配体处理前后互作变化。
4、用于小规模筛选或候选调控因子筛查。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、基因合成-载体构建 15个 1、原始数据、结果图片；
2、标准实验报告(含实验步骤、流程)；
3、含有目的基因的质粒及测序报告；
2、293T瞬时表达
A、细胞培养
B、细胞铺板
C、细胞转染
15个 3、检测
A、荧光素酶检测
B、定量分析
C、数据整理
5个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞样品 3-5×107个细胞 干冰寄送;
干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
总蛋白样品 >1 mL 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/uL，体积>20 uL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500 uL；
提供载体序列和抗性，无污染，去内毒。
干冰寄送;
干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
平板菌 无污染 常温 注意：1、其余类型样品请提前与我司沟通；
2、干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。
案例报告
结果与分析：与对照组相比，实验组NLuc-A与CLuc-B共转染后发光强度显著增强，表明蛋白A与蛋白B在293T细胞中存在相互作用。
图 检测结果
LCA&BiFC
特征 LCA (荧光素酶蛋白互作) BiFC (双分子荧光互补) 信号类型 生物发光（Bioluminescence） 荧光（Fluorescence） 是否需底物 需要（如腔肠素、荧光素） 不需要 是否需激发光 不需要 需要（高能量激发光） 背景信号 极低（无自发荧光） 较高（存在未重组片段的非特异性组装和细胞自发荧光） 实时动态监测 适合，可实时追踪互作起始、增强、减弱 不适合动态变化，成熟过程有延迟且不可逆，易“锁定”瞬时互作 灵敏度 很高，酶促信号放大 高，但受限于荧光亮度及背景 空间分辨率 较低 高，可直接进行精细亚细胞定位和活细胞成像 多色检测 有限 丰富（GFP/YFP/CFP/mCherry等多色搭配） 参考文献
[1]Xie Q, Wang Q, Xu X. Firefly Luciferase Complementation-Based Analysis of Dynamic Protein-Protein Interactions Under Diurnal and Circadian Conditions in Arabidopsis. Methods Mol Biol. 2022;2398:205-213. doi:10.1007/978-1-0716-1912-4_16
[2]Liang Y, Li Z. Split-Luciferase Complementation for Analysis of Virus-Host Protein Interactions. Methods Mol Biol. 2022;2400:55-62. doi:10.1007/978-1-0716-1835-6_6
[3]Kaihara A, Kawai Y, Sato M, Ozawa T, Umezawa Y. Locating a protein-protein interaction in living cells via split Renilla luciferase complementation. Anal Chem. 2003;75(16):4176-4181. doi:10.1021/ac0300800
[4]Wang T, Yang N, Liang C, et al. Detecting Protein-Protein Interaction Based on Protein Fragment Complementation Assay. Curr Protein Pept Sci. 2020;21(6):598-610. doi:10.2174/1389203721666200213102829
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
