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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
IP-MS（免疫沉淀-质谱联用）是将免疫共沉淀（IP）与液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）相结合的技术，用于在蛋白质组水平上无偏地鉴定与目标蛋白相互作用的蛋白质。其原理是基于特异性抗体或其他亲和试剂与靶标蛋白的亲和作用，加入能够与抗体结合的protein-A/G（预先结合固化在琼脂糖球或磁珠上），形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物，通过免疫沉淀将靶标蛋白与靶标蛋白的相互作用蛋白从复杂的样本中提取出来，进而进行质谱检测以鉴定靶标蛋白的相互作用蛋白。
技术体系
服务优势
1、高通量：一次实验可大范围鉴定潜在的互作蛋白质。
2、接近生理状态：在天然条件下捕获，更接近生理状态。
3、样本适用性广：覆盖多种哺乳动物细胞及组织样本。
4、定制化分析：释放数据潜能，满足个性化数据分析需求。
应用场景
1、发现新互作蛋白：无偏鉴定与目标蛋白相互作用的未知伙伴，绘制蛋白互作网络。
2、比较互作组学：分析不同刺激或突变状态下的互作网络变化。
3、疾病机制与标志物：发现致病机制和候选生物标志物。
收样标准
类型 送样标准 运输条件 组织材料 5-10g 干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
细胞样品 3-5×107个细胞 总蛋白样品 >1mL 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/uL，体积>20 uL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500 uL；
提供载体序列和抗性，无污染，去内毒。
干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
平板菌 无污染 常温 抗体 IP级别抗体>30 uL 干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
注意：1、其余类型样品请提前与我司沟通；
2、干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、基因合成-载体构建 15个 1、原始数据、结果图片；
2、标准实验报告(含实验步骤、流程)；
3、含有目的基因的质粒及测序报告。
2、293T瞬时表达
A、细胞铺板
B、细胞转染
C、蛋白表达
15个 3、IP：
A、提取总蛋白
B、磁珠与总蛋白孵育
C、蛋白纯化
D、WB鉴定
7个 4、LC-MS质谱分析 28个 案例报告
1、表达结果
成果提取293T细胞总蛋白，并用磁珠对目的蛋白进行纯化，如图所示，在目的蛋白大小处杂到条带，表明纯化成功。
图 WB鉴定结果
2、质谱交付内容
交付内容 解决问题 数据质控（Raw Data QC） 过滤低质量数据，保证数据可用 基因组比对（Mapping） reads分布与比对率统计 结合位点检测（Peak Calling） 识别蛋白结合峰 基序分析（Motif Analysis） 鉴定结合序列偏好 峰注释（Peak Annotation） 关联基因元件，寻找靶基因 差异峰分析（Differential Peak Analysis） 筛选样本间显著变化区域。 功能富集（Functional Enrichment） GO、KEGG通路分析 可视化（IGV Visualization） 浏览reads堆积与差异图谱 IP-MS与常规Co-IP+WB的区别
项目 IP-MS Co-IP + WB 检测方式 无偏鉴定所有互作蛋白 已知抗体检测特定蛋白 输出结果 全面鉴定已知+未知互作 定性/半定量（已知互作） 适用场景 发现新的互作蛋白/复合物组成 验证特定互作 常见Q&A
Q：如何选择合适的抗体进行IP-MS？
A：优先选择IP级别且经文献或厂家验证可识别天然构象的抗体。若无可信内源抗体，建议使用带标签（Flag、HA、GFP等）的过表达系统，配合相应的标签抗体进行IP，可显著提高富集效率和数据可靠性。Q：弱或瞬时互作蛋白检测不到怎么办？
A：在细胞裂解前加入化学交联剂（如DSS、甲醛、），固定蛋白复合物，防止解离。交联后需用淬灭缓冲液终止反应，裂解条件可能需要适当调整（如延长超声时间）。Q：质谱重复性差，不同批次结果不一致？
A：①固定实验方案（裂解液、洗涤步骤、IP时间）；②设置至少3次生物学重复；③采用数据非依赖性采集（DIA）模式；④对同一批次样品进行技术重复。
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
