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相关产品
- 产品描述
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技术原理
双分子荧光互补（Bimo-lecular fluorescence complementation，简称BiFC），将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。
应用场景
验证蛋白质之间是否存在相互作用，可与酵母双杂、Co-IP等实验结果相互验证；
技术优势
1. 适用于体内和体外蛋白相互作用的验证；
2. 实验中的蛋白处于天然状态，并能直观观察蛋白相互作用在细胞中的定位；实验周期短；
3. 相对于FRET和BRET技术对仪器的要求高、数据处理复杂的情况，BiFC只需要荧光倒置显微镜，数据处理简单，只检测荧光的有无，背景干净，检测更灵敏，不依赖于其他次级效应；
4. 还可以用于研究蛋白之间的弱相互作用或瞬间相互作用；
5. 不需要蛋白有特别的理论配比，能检测到不同亚群蛋白间的相互作用技术步骤
1. 植物材料以及菌株的保存与培养
2. 基因克隆及重组质粒的构建
3. 大肠杆菌TOP10感受态的制备和转化
4. 农杆菌GV3101感受态的制备和转化
5. 农杆菌介导的瞬时表达体系
6. 烟草叶片荧光检测
材料样品处理与保存
类型
送样标准
运输条件
需要基因合成的序列
无
无
构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋
含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。
干冰，1天（5kg）2-3天（10-20kg）3-5天（20-30kg）
平板菌
无污染
常温
服务内容
服务内容
工作日
交付材料
1. 基因合成/载体构建
A基因构建到
pCAMBIA1300-nYFP、
B基因构建到
pCAMBIA1300-cYFP
10个
1、重组质粒一份
2、重组质粒测序结果
3、实验原始图片， 设置1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照。其中对照每组包含YFP、Bright field、Merge各1张，实验组拍摄3个视野，每个视野包含YFP、Bright field、Merge各1张。
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)2. 烟草注射
3. 烟草叶片荧光检测
8个
4. 数据整理 2个
服务说明
1. 本实验默认在烟草中进行。
2. 阳性对照组有荧光，而阴性对照无，则认为对照组正常，实验成功。
3. 若阳性、阴性对照正常，且实验组检测到荧光则认为两个蛋白互作。
案例展示
图1 A与B在烟草中的互作情况
参考文献
1. Wenyuan Ruan,Meina Guo,Xueqing Wang, et al. Two RING-Finger Ubiquitin E3 Ligases Regulate the Degradation of SPX4, An Internal Phosphate Sensor, for Phosphate Homeostasis and Signaling in Rice. Molecular Plant. 2019;12 (8):1060-1074.
2. Brett Burdo,John C. Gray,M. Paula Goetting-Minesky, et al. The Maize TFome – development of a transcription factor open reading frame collection for functional genomics. The Plant Journal. 2014;80 (2):356-366.
3. Bin Ou,Kangquan Yin,Sai-Nan Liu, et al. A High-Throughput Screening System for Arabidopsis Transcription Factors and Its Application to Med25-Dependent Transcriptional Regulation. Molecular Plant. 2011;4 (3):546-555.
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