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- 产品描述
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服务简介
双分子荧光互补技术（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）是一种在活细胞中检测蛋白与蛋白互作的技术。该技术将荧光蛋白（如YFP, Venus）分割成两个不具有荧光活性的片段（如n-YFP，c-YFP），分别融合两个目标蛋白A和B。若A和B发生相互作用，则使两个荧光蛋白片段在空间上充分接近，重新构成具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发出荧光。
应用
蛋白质相互作用验证、复合物组装动态监测、信号通路机制研究、药物靶点筛选
技术优势
1、单次实验可完成多组互作组合平行检测；
2、提供从载体构建、转化到显微成像的全流程服务；
3、在活细胞中实时定位互作位点、真实性高，实验周期短；
4、设置阴性和阳性对照组保证实验可靠性:共定位Marker保证细胞定位准确性。服务内容
植物体系
服务内容 工作日 交付材料 1、亚细胞定位预测 ≤1 1、重组质粒一份
2、重组质粒测序结果
3、实验原始图片， 设置1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照。其中对照每组包含YFP、Bright field、Merge各1张，实验组拍摄3个视野，每个视野包含YFP、Bright field、Merge各1张4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、 基因合成/载体构建
A基因构建到pCAMBIA1300-nYFP
B基因构建到pCAMBIA1300-cYFP
10个 3、烟草注射
4、烟草叶片荧光检测
8个 5、数据整理 2个 动物体系
服务内容 工作日 交付材料 1、载体
pcDNA3.1-nYFP、pcDNA3.1-cYFP
10个 1、重组质粒、大肠杆菌菌液各一份；
2、重组质粒测序结果；
3、实验原始图片，设置1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照，其中每组包含YFP、DAPI、Merge各1张。实验组设置3次重复。
4. 标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、293T细胞培养
3、293T细胞铺板
4、293T细胞转染
15个 5、细胞荧光检测
6、数据整理
5个
材料样品处理与保存
植物体系
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500ul；提供载体序列和抗性，无污染。 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/ul，体积>20ul；提供载体序列和抗性，无污染。 冰袋 平板菌 无污染 常温 动物体系
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells） 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
菌液 提供抗性，菌液量>0.5ml，放置一年以上的甘油菌需活化后送样。 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 质粒 提供抗性，质粒量>20ug 冰袋 平板菌 无污染 常温 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 服务说明
1、植物体系默认在烟草中进行，动物体系默认在293T细胞中进行。
2、 阳性对照组有荧光，而阴性对照无，则认为对照组正常，实验成功。
3、若阳性、阴性对照正常，且实验组检测到荧光则认为两个蛋白互作。
案例展示
图1 A与B在烟草中的互作情况
图2 TRIM5与CD2AP在293T细胞中的互作情况
参考文献
1. Wenyuan Ruan,Meina Guo,Xueqing Wang, et al. Two RING-Finger Ubiquitin E3 Ligases Regulate the Degradation of SPX4, An Internal Phosphate Sensor, for Phosphate Homeostasis and Signaling in Rice. Molecular Plant. 2019;12 (8):1060-1074.
2. Brett Burdo,John C. Gray,M. Paula Goetting-Minesky, et al. The Maize TFome – development of a transcription factor open reading frame collection for functional genomics. The Plant Journal. 2014;80 (2):356-366.
3. Bin Ou,Kangquan Yin,Sai-Nan Liu, et al. A High-Throughput Screening System for Arabidopsis Transcription Factors and Its Application to Med25-Dependent Transcriptional Regulation. Molecular Plant. 2011;4 (3):546-555.
4. Zhang L ,He J ,Zhao W , et al.CD2AP promotes the progression of glioblastoma multiforme via TRIM5-mediated NF-kB signaling[J].Cell Death & Disease,2024,15(10):722-722.DOI:10.1038/S41419-024-07094-7.
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