科研服务
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- 产品描述
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服务简介
双分子荧光互补技术（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）是一种在活细胞中检测蛋白与蛋白互作的技术。该技术将荧光蛋白（如YFP, Venus）分割成两个不具有荧光活性的片段（如n-YFP，c-YFP），分别融合两个目标蛋白A和B。若A和B发生相互作用，则使两个荧光蛋白片段在空间上充分接近，重新构成具有活性的荧光蛋白分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发出荧光。
应用
1.、蛋白质相互作用验证、复合物组装动态监测、信号通路机制研究、药物靶点筛选
2、蛋白互作亚细胞定位分析：验证互作同时，精准定位互作发生的具体亚细胞区域（如细胞核等），助力解析蛋白功能定位与互作机制的关联性。
3、植物蛋白-蛋白互作定性验证（原生质体BiFC）：验证植物原生质体天然细胞环境中的直接物理互作关系，解决由于体外实验结果不准确的问题，为蛋白互作关系提供可靠的体内证据。
服务内容
植物体系（烟草叶片、植物原生质体）
服务内容
工作日
交付材料
1、基因合成/载体构建
pCAMBIA1300-nYFP、pCAMBIA1300-cYFP
10个
1、重组质粒一份
2、重组质粒测序结果
3、实验原始图片， 1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照。
1）烟草叶片：每组包含YFP、共定位Marker、YFP+共定位Marker、Bright field、Merge各1张。实验组设置3次重复。
2）原生质体：每组包含YFP、Bright field、Merge各1张。
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、转化检测
植物体系：农杆菌转化鉴定、烟草叶片注射、荧光检测
原生质体：质粒大抽、原生质体制备转化、荧光检测
15个
3、数据整理
5个
动物体系
服务内容
工作日
交付材料
1、基因合成/载体构建
pcDNA3.1-nYFP、pcDNA3.1-cYFP
10个
1、重组质粒、大肠杆菌菌液各一份；
2、重组质粒测序结果；
3、实验原始图片，设置1组实验组、1组阳性对照、2组阴性对照，其中每组包含YFP、DAPI、Merge各1张。实验组设置3次重复。
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、293T细胞培养
3、293T细胞铺板
4、293T细胞转染
15个
5、细胞荧光检测
6、数据整理
5个
材料样品处理与保存
植物体系（烟草叶片、植物原生质体）
类型
送样标准
运输条件
需要基因合成的序列
无
无
构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/uL，体积>20μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋
含构建好质粒的菌液
含中间载体质粒的菌液
体积>500μL；提供载体序列和抗性，无污染。
干冰，1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
平板菌
无污染
常温
动物体系
类型
送样标准
运输条件
细胞
T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×10^6 cells）
1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
菌液
提供抗性，菌液量>0.5mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样
菌液使用干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
质粒
提供抗性，质粒量>20μg
质粒使用冰袋寄送
平板菌
无污染
常温寄送
注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。
服务说明
1、植物体系可做烟草叶片、原生质体（烟草、玉米、拟南芥、水稻），动物体系默认在293T细胞中进行；
2、阳性对照组有荧光，而阴性对照组无荧光，则认为对照组正常，实验成功；
3、若阳性、阴性对照正常，且实验组检测到荧光则认为两个蛋白互作。
案例展示
图1 A与B在烟草叶片中的互作情况
图2 A与B在烟草原生质体中的互作情况
图3 A与B在玉米原生质体中的互作情况
图4 A与B在水稻原生质体中的互作情况
图5 A与B拟南芥原生质体中的互作情况
参考文献
1. Wenyuan Ruan,Meina Guo,Xueqing Wang, et al. Two RING-Finger Ubiquitin E3 Ligases Regulate the Degradation of SPX4, An Internal Phosphate Sensor, for Phosphate Homeostasis and Signaling in Rice. Molecular Plant. 2019;12 (8):1060-1074.
2. Brett Burdo,John C. Gray,M. Paula Goetting-Minesky, et al. The Maize TFome – development of a transcription factor open reading frame collection for functional genomics. The Plant Journal. 2014;80 (2):356-366.
3. Bin Ou,Kangquan Yin,Sai-Nan Liu, et al. A High-Throughput Screening System for Arabidopsis Transcription Factors and Its Application to Med25-Dependent Transcriptional Regulation. Molecular Plant. 2011;4 (3):546-555.
4. Zhang L ,He J ,Zhao W , et al.CD2AP promotes the progression of glioblastoma multiforme via TRIM5-mediated NF-kB signaling[J].Cell Death & Disease,2024,15(10):722-722.DOI:10.1038/S41419-024-07094-7.
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