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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
亚细胞定位是指确定细胞内特定蛋白质在细胞内的精确位置，包括细胞核、细胞质、细胞膜、以及诸如线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器。了解这些分子的亚细胞定位对于揭示它们的功能、参与的生物学过程以及与其他分子的相互作用至关重要。
实验原理
亚细胞定位采用的方法主要是借助荧光蛋白报告基因来实现目标蛋白定位的融合报告基因定位法，原理主要是将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合，通过瞬时转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出荧光，从而可以精确地定位蛋白质的位置。
技术路线
服务优势
1、结果直观：可直接观察到荧光定位。
2、高空间分辨率：共聚焦显微镜实现亚细胞器区分
3、多色共定位：不同荧光蛋白同时标记，在同一细胞中判断蛋白共定位
4、定位信号解析：可验证特定序列是否负责靶向特定细胞器
应用场景
1、新蛋白功能初筛：判断定位去向，推测潜在功能
2、蛋白互作辅助验证：共定位为互作提供细胞学依据
3、信号通路转位分析：捕获刺激诱导的胞质-核转位等动态过程
4、病理突变定位异常：比较野生型与突变体的定位差异揭示致病机制
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、载体构建/基因合成 15个 1、表达质粒（2 ug左右）；
2、实验原始图片，交付3个视野，共定位每个视野包含4张图（marker、目的蛋白各1张荧光图、1张Bright field、1张merge）；普通定位每个视野包含3张图（1张目的蛋白荧光图、1张Bright field、1张merge）；
3、标准实验报告(含实验步骤、流程)。
2、细胞培养与转染
A、细胞传代、铺板；
B、细胞转染；
C、瞬时表达；
15个 3、激光共聚焦拍摄
A、细胞固定；
B、荧光拍摄。
5个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells） 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送。
菌液 提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）。
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
图 1 激光共聚焦检测图
结论：目的基因定位核蛋白，橙色为共定位。胞质有绿色荧光原因：目的基因初期表达在细胞核，随时间推移会转移到细胞质。
参考文献
Chaturvedi NK, Mir RA, Band V, Joshi SS, Guda C. Experimental validation of predicted subcellular localizations of human proteins. BMC Res Notes. 2014 Dec 15;7:912. doi: 10.1186/1756-0500-7-912. PMID: 25510246; PMCID: PMC4301851.
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