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瑞源生物
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- 产品描述
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产品介绍
邻近标记技术是一种在活细胞中实时标记蛋白质相互作用和空间邻近蛋白的高通量分析方法。通过将生物素连接酶（如TurboID）与目标蛋白融合表达，在添加生物素的条件下，酶活催化生物素共价标记邻近内源蛋白，标记产物可通过链霉亲和素磁珠富集，结合质谱进行鉴定，筛选潜在相互作用蛋白。该技术突破了传统免疫共沉淀无法捕获弱/瞬时相互作用的局限，为蛋白质互作网络、亚细胞蛋白质组学及药物靶点发现提供了有力工具。
技术体系
1、目标基因融合载体构建
2、质粒转化农杆菌GV3101感受态细胞
3、烟草蛋白表达
4、生物素标记与蛋白粗提取
5、蛋白脱盐处理
6、链霉亲和素富集
7、Western Blot初步验证/质谱鉴定
8、生物信息学分析（针对质谱数据）
服务优势
技术优势 平台优势 1、 捕获弱/瞬时互作 1、植物平台：拥有多年植物组织培养、农杆菌介导转化及注射浸润经验，拥有多个成熟的蛋白互作技术体系 2、“原位”与“活体”标记 2、全流程闭环：载体构建、标记、富集到质谱分析，一站式完成 3、兼容多种样本 3、数据透明：交付实验报告、原始数据及生信分析，完整可追溯 4、灵活检测 4、标准验证：以本氏烟草叶片为例，SOP成熟，农杆菌侵染效率高，标记背景干净 应用场景
1、蛋白质相互作用网络解析
2、细胞器/亚细胞结构蛋白质组学，描绘细胞器蛋白图谱
3、信号通路动态变化研究
4、研究膜蛋白复合物，解析核膜蛋白质组
5、解析特定的生物学过程：植物细胞壁合成、植物抗病性、非生物胁迫响应、次生代谢途径
服务内容
服务项目 服务内容 自然日 交付材料 载体 ☐基因合成（密码子优化）
☐基因合成（密码子不优化）
☐载体构建
☐甲方已将目的基因构建动物表达载体，目的基因测序验证
15个 1、 重组质粒一份
2、 重组质粒基因合成报告/载体构建测序结果
3、 实验原始图片，GFP、SA-HRP标签WB鉴定结果各一张（包含input、IP各两个泳道，对照组默认为不加生物素处理组。）
4、 标准实验报告（含实验步骤、流程）
烟草蛋白表达 1、农杆菌转化、鉴定
2、烟草注射
3、生物素处理
4、表达分析鉴定
10个 PL-WB A、样品脱盐
B、链霉亲和素富集
C、Western Blot鉴定
10个 PL-MS 1、MS鉴定
2、数据分析
3、报告撰写
15个 收样标准
需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100ng/μL，体积>20μL；提供载体序列和抗性，无污染。 冰袋 含构建好质粒的大肠菌液
含中间载体质粒的大肠菌液
体积>500μL；提供载体序列和抗性，无污染。 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 大肠平板菌 无污染 常温 抗体 IP级别抗体>30μL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 总蛋白样品 >0.5mL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 转化后的植物材料 >5g 干冰寄送，干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg） 案例报告
1、互作结果：在目的蛋白大小处拉到条带，表明成功富集到生物素化的目的蛋白。
WB鉴定结果
2、质谱结果
（1）GO：结果显示鉴定蛋白在生物学过程、细胞组分和分子功能三个类别中的分布情况，反映了邻近标记富集蛋白的整体功能构成。
（2）KEGG Top Map，全局代谢通路图
参考文献
1、Branon TC, Bosch JA, Sanchez AD, Udeshi ND, Svinkina T, Carr SA, Feldman JL, Perrimon N, Ting AY. Efficient Proximity Labeling in Living Cells and Organisms with TurboID. Nat Biotechnol. 2018;36(9):880-887. Published 2018 Oct. doi:10.1038/nbt.4201
2、Arora D, Abel NB, Liu C, Van Damme P, Yperman K, Vu LD, Wang J, Tornkvist A, Impens F, Korbei B, Eeckhout D, Van Leene J, Goossens A, De Jaeger G, Ott T, Moschou P, Van Damme D. Establishment of Proximity-dependent Biotinylation Approaches in Different Plant Model Systems. bioRxiv. 2020 Mar 27. doi:10.1101/701425.
3、Mair A, Xu SL, Branon TC, Ting AY, Bergmann DC. Proximity labeling of protein complexes and cell-type-specific organellar proteomes in Arabidopsis enabled by TurboID. eLife. 2019;8:e47864. Published 2019 Sep 19. doi:10.7554/eLife.47864.
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