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    科研服务

    立足于生命科学,为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务

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    CrY2H-seq库与库筛选

    Cre-LoxP原理的大规模蛋白互作筛选技术,这是一种以酵母双杂筛库体系为基础,用来筛选蛋白质相互作用的高通量方法。

    • 产品描述
    • 技术原理

      Cre重组酶是一种DNA重组酶,能够识别和催化LoxP序列的重组。LoxP序列是一种特定的DNA序列,通常包含两个反向重复的13 bp序列,之间夹杂一个8 bp序列。Cre重组酶能够识别LoxP序列,并在两个13 bp序列之间切割DNA链,然后重新连接DNA链,导致DNA重组。

      大规模蛋白互作筛选技术的基本原理如下:

      1、构建Cre-LoxP系统载体: 首先,需要构建包含LoxP序列的双向融合蛋白质表达载体,这个载体中包含要筛选的两个文库序列和LoxP序列。

      2、蛋白质相互作用筛选: 将构建好的Cre-LoxP载体应用到酵母双杂筛库体系中,如果两个蛋白之间发生相互作用,Cre重组酶可以识别并催化这个LoxP序列,形成一个新的序列片段。

      3、筛选与鉴定: 基于Cre-LoxP原理的酵母双杂体系筛选出互作蛋白,高通量测序,完成数据的处理分析。

      通过这种技术原理,可以实现大规模蛋白互作筛选,从而研究蛋白之间的相互作用和功能。

       

      服务简介

      南京瑞源生物是一家专业从事蛋白互作验证服务的公司,已拥有成熟的酵母双杂实验体系。在此基础上,我们推出新的蛋白互作验证技术服务—基于Cre-LoxP原理的大规模蛋白互作筛选技术,这是一种以酵母双杂筛库体系为基础,用来筛选蛋白质相互作用的高通量方法。Cre-LoxP系统是一种广泛应用于转基因动物模型中的基因编辑技术,通过这一原理可以实现对特定DNA序列的可控切割和连接,在蛋白质相互作用筛选中,Cre-LoxP系统被利用来实现对蛋白质相互作用的筛选和鉴定。

       

      技术优势

      高通量筛选:Cre-LoxP系统可以应用于大规模蛋白质相互作用筛选,能够同时检测大量蛋白质之间的相互作用,提高筛选效率;

      精确度高:由于Cre-LoxP系统具有较高的特异性和准确性,因此筛选出的蛋白质相互作用结果更加可靠和准确;

      适用范围广:Cre-LoxP系统可以应用于多种细胞和生物体系中,适用性较广。

      第三代测序:配合自激活验证,有效提高阳性互作率

       

      服务流程

       

      交付展示

      CrY2H-seq 库与库筛选
      项目 服务内容 工作日 交付材料
      酵母文库构建 1.RNA 提取
      2.mRNA 提取
      5个 1.初级文库、次级文库甘油菌 各 4ml(分4管)
      2.初级文库(2 管> 200 μg)
      次级 pBDlox 文库质粒(4 管> 400 μg)
      次级 pADlox 文库质粒(4 管> 400 μg)
      3.Word 文档电子版项目报告(含实验数据)
      4.文库承诺达到以下指标:
      文库库容量 >1*107CFU
      平均插入片段 0.8-1.5 kb(因物种而异)
      空载率≤ 5%

      3.cDNA 第一链合成
      4.cDNA 第二链合成
      5.cDNA adapter的制备
      6.cDNA 与 attB1 重组接头连接
      7.cDNA 分级分离
      8.BP 重组(pDONR222)
      9.电转化大肠杆菌 DH10B
      10.文库质检与质粒提取
      11.文库质粒重组(pBDlox、pADlox)
      12.电转化大肠杆菌 DH10B
      13.文库质检与质粒提取

      17 个
      酵母文库筛选 1.感受态制备:
      pADlox 文库质粒、pBDlox 文库质粒、pADlox 空载分别转化酵母
      2.酵母菌落 PCR 鉴定
      3. mating
      4.诱饵文库自激活检测
      5.酵母筛选实验
      6.一代测序
      44 个 1、阳性克隆测序结果(根据测序结果而定)
      2、阳性克隆序列不少于 15 对
      3、Word 文档电子版项目报告(含实验数据)
      测序与分析 1.三代测序
      2.数据分析与整理、互作网络图、结题报告
      22 个 1、三代测序原始数据
      2、互作网络图
      3、Word 文档电子版项目报告(含实验数据)

       

      案例展示

      1、CRE-LoxP体系库筛库阴阳性验证,阳性结果可发现Lox77重组位点且5’端为largeT序列,3’端为p53序列。

      2、该体系应用于文库筛文库互作蛋白筛选,分析比对测序结果,可找到对应的互作蛋白,对文库筛文库三代测序结果进行分析,制作互作网络图。

    声明:本公司出售产品只能用于科研目的,不得用于诊断或者治疗!

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