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瑞源生物
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- 产品描述
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技术原理
泛素化是泛素分子经E1激活酶、E2偶联酶和E3连接酶级联催化共价连接至靶蛋白赖氨酸残基的翻译后修饰，标记后的蛋白常被26S蛋白酶体降解。
本服务以植物组织为材料，通过农杆菌介导的瞬时转化在烟草叶片中共表达带有标签的目标蛋白及候选E3连接酶（或相关调控因子），利用标签抗体富集目标蛋白复合物，再以泛素抗体进行Western blot检测，通过目标蛋白分子量处出现弥散条带或高分子量涂抹区来判定其是否被泛素化修饰，同时对比不同处理组条带强度与迁移模式，评估修饰水平的变化。
服务流程
技术优势
1、体内真实修饰环境
在植物活细胞内进行泛素化反应，结果更贴近生理状态。
2、所用共表达系统灵活高效
农杆菌瞬时共表达目标蛋白与E3连接酶，体系成熟稳定，便于快速验证；
3、成熟高效靶蛋白富集方案
特异性标签抗体高效富集靶蛋白，削弱植物复杂背景干扰，结果稳定可重复；
4、泛素化信号直观明确
泛素抗体WB清晰检测修饰有无及相对强度，结果易判定；
5、数据交付规范完整
交付内容包含详细实验报告、原始免疫印迹图及结果解读。
送样标准
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/μL，体积>20 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的大肠菌液
含中间载体质粒的大肠菌液
体积>500 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 大肠平板菌 无污染 常温 抗体 IP级别抗体>30 uL 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、基因合成/载体构建 15个 1、重组质粒一份
2、重组质粒基因合成报告/载体构建测序结果
3、实验原始图片，GFP、FLAG标签WB鉴定结果各一张（包含Input、IP各两个泳道。如果使用其他标签对照会做相应修改。）
4、标准实验报告(含实验步骤、流程)
2、农杆菌转化、鉴定
3、烟草注射
4、表达分析鉴定
10个 5、免疫沉淀
6、泛素化WB检测
20个 案例展示
图1 CO-IP实验图片
图2泛素化结果
结论：在Input中，成功检测到了GFP-B和MYC-A蛋白，表明蛋白正常表达。在GFP富集以后，GFP-B能够与MYC-A蛋白发生免疫共沉淀，而GFP与MYC-A蛋白无法发生免疫共沉淀，表明A和B互作（见图1）。而在泛素化检测中，与MYC-A共表达的GFP-B的泛素化水平提高，表明GFP-B可以被MYC-A泛素化（见图2）。
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