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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
染色质免疫共沉淀（ChIP）技术是研究哺乳动物细胞内蛋白质与DNA相互作用的关键方法，广泛应用于转录因子结合位点分析、组蛋白修饰鉴定及表观遗传调控机制研究。本技术通过甲醛交联固定蛋白-DNA复合物、超声破碎染色质、特异性抗体富集目标蛋白结合的DNA片段，并结合实时定量PCR（qPCR）对特定DNA序列进行定量分析，从而精确验证目标蛋白在基因组特定区域的结合情况。
技术体系
1、样品制备：包括细胞/组织交联与裂解。
2、染色质片段化：通过超声将染色质打断至200-500 bp。
3、免疫沉淀：使用目的蛋白特异性抗体（或标签抗体）富集蛋白-DNA复合物。
4、DNA纯化：解交联后纯化DNA。
5、qPCR验证：使用特异性引物对目标区域进行定量检测，计算富集倍数。
服务优势
1、高特异性富集：严格阴阳性对照，确保结合信号真实特异。
2、高灵敏度定量：qPCR精准检测低丰度蛋白-DNA结合事件，微弱信号也不遗漏。
3、一站式服务：覆盖载体构建到数据分析全流程，专业团队提供完整实验方案。
4、多类型样本经验：覆盖多种哺乳动物细胞及组织样本。
应用场景
1、验证特定转录因子在目标基因启动子区域的结合。
2、研究组蛋白修饰（如H3K4me3，H3K27ac）在基因组特定区域的富集情况。
3、解析表观遗传调控机制，如DNA甲基化与组蛋白修饰的相互关系。
4、在药物开发中，评估化合物对靶蛋白与DNA结合能力的影响。
服务内容
服务项目 服务内容 自然日 交付材料 载体构建工作 A、载体构建；
B、基因合成；
C、原质粒测序；
10个 A、载体构建：无；
B、基因合成：质粒、甘油菌；
瞬时表达转染 A、细胞培养；
B、质粒抽提；
C、细胞转染；
D、瞬时表达；
10个 A、阳性鉴定结果图； 目的基因表达鉴定 A、目的蛋白提取；
B、目的蛋白WB鉴定；
10个 A、目的蛋白WB鉴定图； ChIP-qPCR A、组织交联；
B、ChIP富集；
C、诱饵蛋白鉴定；
D、解交联与DNA纯化；
E、qPCR验证。
10个 A、诱饵蛋白的WB检测图 ；
B、ChIP实验报告。
样本要求
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 构建好的/ 中间载体质粒 浓度>200 ng/uL，体积>20 uL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒/含中间载体质粒的菌液 体积>500 uL；
提供载体序列和抗性，无污染。
干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
抗体（常见标签抗体无需提供 IP级别抗体>30uL 干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg）
动物组织 质量：5-7 g；PBS清洗后，滤纸吸干液体，用无菌剪刀剪成碎片（越小越好）收集到15 mL离心管中，液氮速冻5 min以上，-80 ℃保存。 动物细胞 3-5×107个/细胞 冰袋 平板菌 无污染 常温 案例报告
1、样品中目的蛋白丰度鉴定：目的蛋白表达丰度良好，满足后续IP实验要求。
图 总蛋白鉴定
M：Marker，1：总蛋白。
2、ChIP / Western-blot结果：目的条带清晰，无降解杂带。
图 ChIP-WB鉴定
3、核酸浓度测定
IP实验DNA提取结果及Qubit定量检测，检测结果如下：
样品名称 浓度（ng/μL） 体积（μL） 总量（ng） OD260/OD280 OD260/OD230 IP-FLAG 0.754 15 11.31 1.21 1.34 Input 42.8 40 1744 1.46 1.22 DNA提取结果和Qubit定量确认了IP富集步骤成功捕获到了DNA。
4、qPCR结果：A样本富集信号显著高于IgG对照组，目的蛋白在该基因区域存在特异性结合。
参考文献
[1] Akkers RC, Jacobi UG, Veenstra GJ. Chromatin immunoprecipitation analysis of Xenopus embryos. Methods Mol Biol. 2012;917:279-292. doi:10.1007/978-1-61779-992-1_17
[2] Kim TH, Dekker J. ChIP-Quantitative Polymerase Chain Reaction (ChIP-qPCR). Cold Spring Harb Protoc. 2018;2018(5):10.1101/pdb.prot082628. Published 2018 May 1. doi:10.1101/pdb.prot082628
[3] Kurtenbach S, Reddy R, Harbour JW. ChIPprimersDB: a public repository of verified qPCR primers for chromatin immunoprecipitation (ChIP). Nucleic Acids Res. 2019;47(D1):D46-D49. doi:10.1093/nar/gky813
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