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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
细胞瞬转是通过化学、物理或生物方法，将携带外源基因的质粒DNA导入真核细胞，使基因在短时间内获得高水平表达，但外源DNA不整合到宿主染色体中，随细胞分裂而逐渐稀释和丢失。
实验原理
外源质粒进入细胞核后，以游离环状DNA形式存在。利用宿主细胞的转录和翻译机器，质粒上的外源基因在强启动子（如CMV）驱动下，在转染后24-96小时内大量转录mRNA并翻译成蛋白。由于未与基因组整合，其表达随细胞传代而快速衰减，通常维持数天。
经典实验流程
1、细胞准备：转染前一天铺板，使转染时密度达70-90%。
2、转染复合物制备：将质粒DNA与转染试剂（如PEI、脂质体）分别稀释后混合，室温孵育形成复合物。
3、转染：复合物滴加入细胞培养液，4-6小时后可换液。
4、表达与检测：24-96小时内收集细胞，通过Western blot、荧光显微镜、报告基因等分析蛋白表达。
服务优势
1、操作简便：直接转染质粒即可，无需病毒包装、单克隆筛选等复杂步骤。
2、表达效率高：外源基因以高拷贝游离形式存在于核内，短时间内可获得较高水平的蛋白表达，满足多数科研需求。
3、应用灵活：可同时转染多个质粒进行共表达。
4、无基因组整合风险：外源DNA不整合到宿主染色体中，避免插入突变导致的细胞功能异常或基因背景改变，结果更直接反映目的基因本身的功能。
应用场景
1、基因功能快速验证。
2、蛋白互作初筛。
3、蛋白瞬时表达与纯化。
4、病毒包装。
5、SiRNA、miRNA功能筛选。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、载体构建/基因合成
15个 1、表达质粒（2 ug左右）；
2、完整的实验报告。
2、表达鉴定
A、转染细胞
B、表达分析鉴定（WB）
20个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells），提供细胞名称和培养方式 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
菌液 提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
如图所示，与对照组相比，过表达组中目的蛋白的条带强度显著增强，表明转染成功且有效实现了目的基因的过表达。结果如下（图 1）：
图 1 WB鉴定图
与细胞稳转的核心区别
类型 细胞稳转 细胞瞬转 外源DNA状态 整合至基因组 游离于核内 表达时长 可长期持续表达 24-96小时 均一性 单克隆株均一 细胞间差异大 操作复杂程度 高，需病毒包装或长期筛选 低，直接转染即可 筛选标记 必需（嘌呤霉素/潮霉素等抗性基因） 通常无需 适用场景 长期功能研究、药物筛选 快速功能验证、蛋白瞬时表达、病毒包装
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
