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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
本服务采用免疫荧光（IF）技术对目标蛋白在细胞中的定位及表达水平进行可视化分析。该方法通过特异性抗体结合荧光标记，实现蛋白在细胞内的空间分布观测，适用于亚细胞定位、蛋白共定位及信号通路研究。
实验原理
免疫荧光是基于抗原-抗体特异性结合，通过荧光标记实现靶蛋白可视化定位的检测技术。核心原理是：使用特异性一抗识别并结合目的蛋白（抗原），随后以荧光基团偶联的二抗结合一抗的Fc段，实现信号级联放大；也可采用直接免疫荧光法，即荧光基团直接标记于一抗。最终通过荧光显微镜在特定激发波长下观察荧光信号，确定靶蛋白在细胞或组织中的亚细胞定位与表达分布。
技术路线
应用场景
1、观察蛋白在细胞核、细胞质、细胞膜或细胞器中的定位。
2、分析不同处理前后蛋白表达与转位变化。
3、开展蛋白共定位研究。
服务优势
1、结果直观：直接看到荧光定位，可区分核、胞质、膜、细胞器位置。
2、适用于比较不同处理、突变型。
3、样本适用性广：覆盖多种哺乳动物细胞及组织样本。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 直接法（荧光一抗）
25个 1、所有实验的原始数据（包括实验程、实验试剂与设备等）；
2、同张片子的3个视野的IF染色图片；
3、IF染色详细实验报告及结果分析。
间接法（荧光二抗）
送样标准
类型 送样标准 运输条件 细胞 T25瓶（活率>95%）或冻存细胞（>1×106 cells） 1、T25瓶细胞使用常温或冰袋运输，不可使用干冰，T25瓶封口膜密封，填充新鲜培养基充满容器 > 90%体积，固定后选择最快运输方式进行寄送。若冰袋运输，注意细胞面远离冰袋。
2、对于长距离或无法保证快速运输的情况，强烈建议-80℃冻存细胞后干冰寄送
抗体 提供稀释比例、种属、反应性、抗体体积>20 uL 抗体可使用冰袋运输，避免使用干冰，使用密封性较好的离心管，封口膜密封寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
图1 荧光显微镜图
绿色荧光为目标蛋白（FITC 标记），蓝色荧光为细胞核（DAPI 染色），Merge为叠加图像。结果显示目标蛋白主要定位于细胞质。
常见问题
Q：为什么完全看不到荧光信号？
A：通常因一抗不适用于IF、二抗种属不匹配、固定透化过度或显微镜激发波长设置错误。Q：背景荧光极高、整片都是信号怎么办？
A：降低一抗浓度、延长封闭与洗涤时间，并使用前离心抗体去除聚合物。Q：细胞形态碎裂或掉片如何解决？
A：用温和的4%多聚甲醛固定、降低透化剂浓度并全程避免样本干燥。Q：如何证明观察到的荧光是特异性信号？
A：必须设置不加一抗和同型对照，两者均为阴性时实验组信号才可信。
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