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瑞源生物
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- 产品描述
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技术原理
DAP-seq（DNA Affinity Purification sequencing）是一种体外高通量鉴定转录因子全基因组结合位点的技术。本服务采用原核表达系统表达带有标签的目标转录因子，提取并片段化基因组 DNA，将原核表达的目标转录因子与基因组 DNA 片段共孵育，通过亲和纯化富集转录因子结合的 DNA 片段，构建测序文库并进行高通量测序，最终通过生物信息学分析鉴定转录因子全基因组结合位点、结合 motif、靶基因及富集通路。
该技术适用于植物、动物、微生物等多种物种，可用于解析激素信号转导、逆境胁迫响应、发育调控及基因表达调控网络。服务交付完整的原始数据、peak 分析、motif 分析、靶基因注释、富集分析结果及详细实验报告，为转录因子功能研究提供直接可靠的高通量证据。
图 DAP-seq原理图（O'Malley et al., 2016）
实验流程
优势
1、体系灵活稳定：依托原核表达与体外结合反应，规避物种限制，特别是非模式植物；
2、摆脱抗体局限：可避开抗体质量限制，适用于缺乏优质抗体转录因子的研究；
3、通量高：一次实验可获取全基因组范围内的结合位点信息，通量高、覆盖广；
4、数据维度丰富：可输出peak、motif、富集通路等多层次结果，便于构建调控网络；
5、交付完整：包含详细实验报告、原始数据、分析结果及结果解读。
应用
1、转录因子全基因组结合位点鉴定；
2、植物激素信号转导关键 TF 靶基因解析；
3、 逆境胁迫响应调控网络研究；
4、发育调控与基因表达调控网络构建；
5、 转录因子突变体或不同处理条件下结合模式比较；
6、多物种转录因子结合图谱与进化分析。
送样标准
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 构建好的质粒
中间载体质粒
浓度>100 ng/μL，体积>20 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
冰袋 含构建好质粒的大肠菌液
含中间载体质粒的大肠菌液
体积>500 μL；
提供载体序列和抗性，无污染。
干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 大肠平板菌 无污染 常温 样品 ≥4-6 g液氮速冻 干冰寄送，干冰使用量：1天（5 kg）、2-3天（10-20 kg）、3-5天（20-30 kg） 新鲜植株 新鲜茁壮植物植株，无损坏、病害，10-15 g 常温 服务内容
服务内容 自然日 交付材料 1、基因合成/载体构建 15个 1、默认使用我司优化载体，不交付质粒，交付剩余蛋白；
2、实验相关原始图片：蛋白表达SDS-PAGE鉴定、高通量测序原始数据、生信分析结果。
2、原核表达 15个 3、DAP-seq
A、样品质检
B、基因组DNA片段化与回收；
C、蛋白-DNA结合反应；
D、结合DNA片段富集与纯化；
E、文库构建与质量检测；
F、高通量测序；
G、数据分析；
40个 案例展示
图 蛋白表达检测结果
M：Protein Marker；
1-8：未诱导样品、诱导后样品、破碎后上清样品、破碎后沉淀样品、上清流出液样品、50 mM咪唑洗脱样、100 mM咪唑洗脱样、250 mM咪唑洗脱样；
注：pRYE-HIS载体融合有分子伴侣，标签总大小为48 kDa。
图 DNA片段化检测
M：Marker，1-2：超声后片段化的DNA片段；
声明：本公司出售产品只能用于科研目的，不得用于诊断或者治疗！
