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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
哺乳蛋白表达是以哺乳动物细胞为宿主，将外源目的基因构建到含强启动子的真核表达载体上，通过瞬时转染或稳定筛选，质粒进入细胞核并在启动子驱动下进行高水平转录。转录出的mRNA在胞质中利用细胞自身的核糖体、分子伴侣和折叠酶完成翻译与正确折叠，同时获得磷酸化、糖基化、乙酰化等天然翻译后修饰，最终形成具有完整生物活性的成熟蛋白。
服务优势
1、天然构象与完整活性：利用哺乳动物细胞内的分子伴侣和折叠环境，蛋白正确折叠率高，接近体内天然状态，活性远优于原核系统。
2、复杂翻译后修饰：可完整进行磷酸化、糖基化、乙酰化、泛素化等修饰，尤其适合需要特定糖型或修饰才具功能的分泌蛋白、膜蛋白。
3、高效瞬时表达：293T等细胞转染效率极高，数天内即可获得毫克级蛋白，周期远短于稳定细胞系构建。
应用场景
1、蛋白-蛋白互作验证：体外Pull-down、GST pull-down等验证直接互作，排除其他蛋白质桥接。
2、蛋白-核酸互作分析：EMSA检测转录因子与DNA/RNA探针结合活性，要求蛋白完整修饰与构象。
3、药物靶点与活性筛选：高纯度活性蛋白用于小分子结合实验（SPR、CETSA）、酶活抑制剂筛选。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 载体构建/基因合成 15个 1、表达质粒（2 ug左右）
2、标准的哺乳动物蛋白表达的服务报告。
3、蛋白样品
表达鉴定：
（1）30 mL细胞表达蛋白
（2）重组蛋白纯化
（3）蛋白QC质检（SDS-PAGE与WB鉴定）
25个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 菌液 提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5kg）、2-3天（10-20kg）、3-5天（20-30kg）
质粒 提供抗性，质粒量>20 ug 质粒使用冰袋寄送 平板菌 无污染 常温寄送 注意：干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。 案例报告
1、纯化结果
图1 目的蛋白纯化SDS-PAGE电泳检测结果
M：Marker；Me：培养基样；FT：流出样；W1-W2：清洗样；E1~E5：洗脱样。
根据SDS-PAGE电泳结果，将洗脱样E1~E5合并进行透析实验，蛋白最终样进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测，检测结果如图2所示。
图2 目的蛋白最终样SDS-PAGE电泳检测结果和Western blot检测结果（HRP-Conjugated 6×His，His-Tag Monoclonal Antibody孵育，ECL显色）
M：Marker；1：还原性样品；2：非还原性样品。
结果显示：目的蛋白使用哺乳动物细胞表达，电泳图中泳道可以看到条带。
参考文献
[1] Frei T, Cella F, Tedeschi F, et al. Characterization and mitigation of gene expression burden in mammalian cells. Nat Commun. 2020;11(1):4641. Published 2020 Sep 15. doi:10.1038/s41467-020-18392-x
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