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瑞源医学
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- 产品描述
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服务简介
CRISPR-Cas12a酵母基因编辑是一种利用Cas12a核酸内切酶在酵母细胞中进行基因组精准编辑的技术。其核心定义为：在crRNA引导下，Cas12a识别酵母基因组中T-richPAM序列，对靶位点进行交错切割，产生粘性末端双链断裂，随后通过酵母内源的DNA修复通路实现基因敲除或敲入。通过CRISPR技术实现酵母特定基因的定向敲除，以探究目标基因的生物学功能与作用机制。
服务优势
1、敲除效率极高：阳性克隆获得率远超传统方法。
2、周期短，操作便捷：无需多轮筛选。
3、可无痕敲除：设计同源臂供体时可不引入任何抗性或标记基因，避免标记基因对后续实验的干扰。
4、无物种限制：适用于各类酵母宿主，只需针对不同物种优化密码子和启动子。
应用场景
1、基因功能深度解析：系统性敲除候选基因，分析其在细胞周期、应激反应、自噬等生理过程中的作用。
2、代谢通路重构：快速敲除旁路竞争基因或负调控因子，提高目标代谢产物（如乙醇、有机酸、萜类）产量。
3、合成生物学底盘改造：对酵母基因组进行“清洗”和简化，构建最小基因组底盘，用于植入人工合成通路。
4、药物靶标验证：在酵母模型中敲除人类疾病相关基因的同源基因，测试药物或化合物的功能回复效果。
服务内容
服务内容 自然日 交付材料 质粒验证 1、提供序列
2、提供质粒：测序验证
15个 1、敲除成功的菌株甘油菌、平板；
2、测序文件；
3、电子版实验报告1份。
基因敲除 1、CRISPR敲除靶点设计
2、敲除模块构建
3、载体构建
4、基因敲除
5、菌P验证
6、测序鉴定
7、阳性克隆扩增
8、结果鉴定
63个 收样标准
类型 送样标准 运输条件 需要基因合成的序列 无 无 构建好的/
中间载体质粒
浓度>100 ng/uL，体积>20 uL；提供载体序列和抗性，无污染。 质粒使用冰袋寄送 含构建好质粒/
含中间载体质粒的菌液
提供抗性，菌液量>0.5 mL，放置一年以上的甘油菌需活化后送样。 菌液使用干冰寄送；
干冰使用量：1天（5 kg）2-3天（10-20 kg）3-5天（20-30 kg）
平板菌 无污染 常温 注意：1、其余类型样品请提前与我司沟通；
2、干冰取样及运输，至少在送样前2天通知我司。
案例报告
1、转化生长情况
电转化后涂 100 mg/L G418 的 YPD 平板上，可见密集单菌落，长斑正常（图 1）。
图 1 转化平板
2、PCR鉴定结果
PCR 鉴定位点如下图所示（图2）。
图 2 PCR 鉴定结果
3、测序结果
测序结果显示目标区域被精确删除，上下游同源臂正确连接（图 3）。
图 3 敲除测序验证
参考文献
[1] Laughery MF, Wyrick JJ. Simple CRISPR-Cas9 Genome Editing in Saccharomyces cerevisiae. Curr Protoc Mol Biol. 2019;129(1):e110. doi:10.1002/cpmb.110
[2] Kapoor SA, Choudhary P, Kasana RC. Exploring CRISPR/Cas9-Mediated Gene Editing Advances in Conventional and Non-conventional Yeast Species. Appl Biochem Biotechnol. 2025;197(11):7083-7122. doi:10.1007/s12010-025-05382-2
[3] Holkenbrink C, Dam MI, Kildegaard KR, et al. EasyCloneYALI: CRISPR/Cas9-Based Synthetic Toolbox for Engineering of the Yeast Yarrowia lipolytica. Biotechnol J. 2018;13(9):e1700543. doi:10.1002/biot.201700543
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