科研服务
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- 产品描述
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技术背景
Gateway 技术是由 Invitrogen 于 1999 年开发的,最初用于构建无限制性酶切位点的克隆载体,后来也用于构建酵母文库。Gateway 技术的原理是利用细菌噬菌体 λ 的重组系统,将特异性的重组序列加到 DNA 片段的两端,从而实现不同载体间的 DNA 转移
技术原理
技术优势
1、具备多种材料 RNA 提取方法,高质量 RNA 有效提高后续文库质量
2、完善的质检流程,文库进行 PCR 鉴定与测序,确保物种正确
3、提供后续文库售后和下游筛库指导
4、建库一年送三险,运输损坏险、储存不当险、意外丢失险,解决后顾之忧
5、根据不同的载体需求,提供文库个性化定制服务内容
核系统酵母文库(Gateway 技术)
服务内容
周期(工作日)
交付内容
1、RNA 提取
2、mRNA 提取
5 天
1、初级文库、次级文库甘油菌各 4 ml( 分 4 管)
2、初级文库质粒 (2 管> 200 ug)、次级文库质粒 (4 管 >400 ug)
3、Word 文档电子版项目报告 ( 含实验数据 )
4、文库承诺达到以下指标 :
文库库容量 >1*107 CFU
平均插入片段 0.8-1.5 kb(因物种而异)空载率 <5 %
3、cDNA 第一链合成
4、cDNA 第二链合成
5、cDNA adapter 的制备
6、cDNA 与 attB1 重组接头连接
7、cDNA 分级分离
8、BP 重组 (pDONR222)
9、电转化大肠杆菌 DH10B
10、文库质检与质粒提取
11、文库质粒重组 (pGADT7)
12、电转化大肠杆菌 DH10B
13、文库质检与质粒提取
14、数据整理和分析
17 天
膜系统酵母文库(Gateway 技术) 服务内容
周期(工作日)
交付内容
1、RNA 提取
2、mRNA 提取5 天
1、初级文库、次级文库甘油菌各 4 ml( 分 4 管)
2、初级文库质粒 (2 管> 200 ug)、次级文库质粒 (4 管 >400 ug)
3、Word 文档电子版项目报告 ( 含实验数据 )
4、文库承诺达到以下指标 :
文库库容量 >1*107 CFU
平均插入片段 0.8-1.5 kb(因物种而异)空载率 <5 %
3、cDNA 第一链合成
4、cDNA 第二链合成
5、cDNA adapter 的制备
6、cDNA 与 attB1 重组接头连接
7、cDNA 分级分离
8、BP 重组 (pDONR222)
9、电转化大肠杆菌 DH10B
10、文库质检与质粒提取
11、文库质粒重组 (pPR3-N)
12、电转化大肠杆菌 DH10B
13、文库质检与质粒提取
14、数据整理和分析17 天
案例展示
取样方法及注意事项
快速收集
样本需要在采集、制备、储存、运输中尽量做到迅速和及时性,尽可能缩短样本采集到实验的周期,从而保证样本的质量和稳定性。
低温保存(鲜样样本)
采集样本离体后,如有分离步骤需要在4℃条件或冰上等低温环境下进行,分离好的样本立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,并保证在实验前处于-80℃以下。
样本寄送
样品名称简单、清晰、准确,填写好样品委托单后打印纸质版随样品一起邮寄。
样品包装:建议样品用锡箔纸、离心管包装,使用油性记号笔填写样本编号,再装入自封袋中,避免样品包装破损样品散落。
样品寄送:选择合适大小的泡沫盒,干冰用量1 天(5kg),2-3 天(10-20kg)3-5 天(20-30kg),并密封。
材料样品处理与保存
SMART建库
Gateway、In-Gate建库
取样注意事项
RNA
样品
>2ug
>400ug
需要质量较好无降解的RNA。需要提供琼脂糖电泳检测胶图,能清晰的看到28S和18S两条带。
植物组织(根茎叶种子)
单个样品重量>2g
需要至少一份备份样品
单个样品重量>10g
需要至少一份备份样品
(叶片/花/茎/种子)剪取适量新鲜新鲜样品;(根系)将根部泥土清洗干净后再将根系剪下来,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻
植物组织(果实)
单个样品重量>10g
需要至少一份备份样品
单个样品重量>50g
需要至少一份备份样品
果实样品较大,如桃肉等,利用工具将果肉切成1-2cm块状大小,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻
动物组织/昆虫
单个样品重量>2g
需要至少一份备份样品
单个样品重量>10g
需要至少一份备份样品
取适量的组织、昆虫样品,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻
真菌
单个样品重量>2g
需要至少一份备份样品
单个样品重量>10g
需要至少一份备份样品
真菌为液培状态,离心收集去除上清,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻,真菌为平板菌状态,需要使用封口膜封好,泡沫固定在泡沫盒内,常温或冰袋寄送。
动物细胞/ PBMC
单个样品细胞>1*107 cfu
需要至少一份备份样品
单个样品细胞>1*108 cfu
需要至少一份备份样品
细胞:用PBS将细胞洗下来,600g转速离心,弃上清,收集细胞,将整个EP管置于液氮速冻。PBMC:尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离;体积为500-1000ul,使用无菌管保存,如果有抗凝剂最好加入抗凝剂,放-80℃保存。
声明:本公司出售产品只能用于科研目的,不得用于诊断或者治疗!

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