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    科研服务

    立足于生命科学,为基础研究领域科学工作者提供生物学高端技术服务

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    酵母文库构建(Gateway 技术)

    Gateway 技术是由 Invitrogen 于 1999 年开发的,最初用于构建无限制性酶切位点的克隆载体,后来也用于构建酵母文库。Gateway 技术的原理是利用细菌噬菌体 λ 的重组系统,将特异性的重组序列加到 DNA 片段的两端,从而实现不同载体间的 DNA 转移

    • 产品描述
    • 技术背景

      Gateway 技术是由 Invitrogen 于 1999 年开发的,最初用于构建无限制性酶切位点的克隆载体,后来也用于构建酵母文库。Gateway 技术的原理是利用细菌噬菌体 λ 的重组系统,将特异性的重组序列加到 DNA 片段的两端,从而实现不同载体间的 DNA 转移

       

      技术原理

       

      技术优势

      1、具备多种材料 RNA 提取方法,高质量 RNA 有效提高后续文库质量
      2、完善的质检流程,文库进行 PCR 鉴定与测序,确保物种正确
      3、提供后续文库售后和下游筛库指导
      4、建库一年送三险,运输损坏险、储存不当险、意外丢失险,解决后顾之忧
      5、根据不同的载体需求,提供文库个性化定制

       

      服务内容

      核系统酵母文库(Gateway 技术)

      服务内容

      周期(工作日)

      交付内容

      1、RNA 提取

      2、mRNA 提取

      5 天

       

      1、初级文库、次级文库甘油菌各 4 ml( 分 4 管)

      2、初级文库质粒 (2 管> 200 ug)、次级文库质粒 (4 管 >400 ug)

      3、Word 文档电子版项目报告 ( 含实验数据 )

      4、文库承诺达到以下指标 :

      文库库容量 >1*107 CFU

      平均插入片段 0.8-1.5 kb(因物种而异)空载率 <5 %

      3、cDNA 第一链合成

      4、cDNA 第二链合成

      5、cDNA adapter 的制备

      6、cDNA 与 attB1 重组接头连接

      7、cDNA 分级分离

      8、BP 重组 (pDONR222)

      9、电转化大肠杆菌 DH10B

      10、文库质检与质粒提取

      11、文库质粒重组 (pGADT7)

      12、电转化大肠杆菌 DH10B

      13、文库质检与质粒提取

      14、数据整理和分析

      17 天

       

      膜系统酵母文库(Gateway 技术)

      服务内容

      周期(工作日)

      交付内容

      1、RNA 提取
      2、mRNA 提取

      5 天

       

      1、初级文库、次级文库甘油菌各 4 ml( 分 4 管)

      2、初级文库质粒 (2 管> 200 ug)、次级文库质粒 (4 管 >400 ug)

      3、Word 文档电子版项目报告 ( 含实验数据 )

      4、文库承诺达到以下指标 :

      文库库容量 >1*107 CFU

      平均插入片段 0.8-1.5 kb(因物种而异)空载率 <5 %

      3、cDNA 第一链合成
      4、cDNA 第二链合成
      5、cDNA adapter 的制备
      6、cDNA 与 attB1 重组接头连接
      7、cDNA 分级分离
      8、BP 重组 (pDONR222)
      9、电转化大肠杆菌 DH10B
      10、文库质检与质粒提取
      11、文库质粒重组 (pPR3-N)
      12、电转化大肠杆菌 DH10B
      13、文库质检与质粒提取
      14、数据整理和分析

      17 天

       

      案例展示

       

      取样方法及注意事项

      快速收集

      样本需要在采集、制备、储存、运输中尽量做到迅速和及时性,尽可能缩短样本采集到实验的周期,从而保证样本的质量和稳定性。

       

      低温保存(鲜样样本)

      采集样本离体后,如有分离步骤需要在4℃条件或冰上等低温环境下进行,分离好的样本立即置于液氮、干冰或-80℃冰箱中,并保证在实验前处于-80℃以下。

       

      样本寄送

      样品名称简单、清晰、准确,填写好样品委托单后打印纸质版随样品一起邮寄。

      样品包装:建议样品用锡箔纸、离心管包装,使用油性记号笔填写样本编号,再装入自封袋中,避免样品包装破损样品散落。

      样品寄送:选择合适大小的泡沫盒,干冰用量1 天(5kg),2-3 天(10-20kg)3-5 天(20-30kg),并密封。

       

      材料样品处理与保存

       

      SMART建库

      Gateway、In-Gate建库

      取样注意事项

      RNA

      样品

      >2ug 

      >400ug 

      需要质量较好无降解的RNA。需要提供琼脂糖电泳检测胶图,能清晰的看到28S和18S两条带。

      植物组织(根茎叶种子)

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      (叶片/花/茎/种子)剪取适量新鲜新鲜样品;(根系)将根部泥土清洗干净后再将根系剪下来,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      植物组织(果实)

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>50g

      需要至少一份备份样品

      果实样品较大,如桃肉等,利用工具将果肉切成1-2cm块状大小,用锡箔纸包好或者放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      动物组织/昆虫

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      取适量的组织、昆虫样品,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻

      真菌

      单个样品重量>2g

      需要至少一份备份样品

      单个样品重量>10g

      需要至少一份备份样品

      真菌为液培状态,离心收集去除上清,放入50mL 离心管中,写上编号,置于液氮速冻,真菌为平板菌状态,需要使用封口膜封好,泡沫固定在泡沫盒内,常温或冰袋寄送。

      动物细胞/ PBMC

      单个样品细胞>1*107 cfu

      需要至少一份备份样品

      单个样品细胞>1*108 cfu

      需要至少一份备份样品

      细胞:用PBS将细胞洗下来,600g转速离心,弃上清,收集细胞,将整个EP管置于液氮速冻。PBMC:尽量使用采集后24h内的血液进行PBMC分离;体积为500-1000ul,使用无菌管保存,如果有抗凝剂最好加入抗凝剂,放-80℃保存。

       

       

    声明:本公司出售产品只能用于科研目的,不得用于诊断或者治疗!

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