科研服务
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- 产品描述
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服务简介
酵母三杂交技术是由酵母双杂交技术改进而来的，这套系统引进了一个 pBridge 的质粒，这个质粒的特点是能够同时插入两个外源蛋白，在 MCSI 插入的蛋白的 N 端仍然融合 Gal4 系统中的 BD 结合域氨基酸多肽片段，而在 MCSII 中插入的蛋白不融合任何标签，但是在其上游有一个 Pmet25 启动子，这个启动子的特点是只有在甲硫氨酸 (Met) 缺乏的时候才能工作，使下游蛋白基因表达，所以必须要在甲硫氨酸缺陷型培养基中进行实验。同样将 pBridge 质粒转化到 Y2HGold 菌株中。同时，将第三个蛋白基因克隆到 pGADT7 载体上，然后转化到 AH109 酵母菌株中，然后再将这两种菌进行小量结合，其余操作步骤跟酵母双杂交系统一致。唯一的区别就是所有的缺陷型培养基都必须是甲硫氨酸缺陷型的基础上配置。如果这三个蛋白能够发生互作，则能够在五缺培养基 (SD/-Met/-Ade/-His/-Leu/-Trp)上生长。
技术优势
1、酵母三杂交系统操作简单，可用于细胞内核酸水平实验验证
2、酵母三杂由酵母双杂交技术发展而来，在研究蛋白质复合体、蛋白质修饰机制方面得到广泛应用样本要求
样品类型 样品需求 保存条件（℃） 运输条件 细胞样本 细胞数量大于 1*108 -80 干冰 动物样本 大于 5 g -80 干冰 植物样本 大于 5 g -80 干冰 总 RNA 大于 400 μg -80 干冰 服务内容
酵母核文库三杂交筛选
服务内容 周期（工作日） 交付材料 1、基因合成（密码子优化）/载体构建到酵母载体pBridge 10 个 1、阳性克隆测序结果（根据测序结果而定）
2、阳性克隆酵母序列大于15个
3、Word文档电子版项目报告（含实验数据）
4、诱饵质粒
2、诱饵质粒的自激活检测 7 个 3、诱饵质粒与文库质粒共转
4、酵母筛选的条件优化
5、筛选结果测序
10 个 6、筛选结果回转验证
7、数据整理和分析
5 个 8、NGS测序
9、数据整理分析
8 个 酵母三杂交一对一互作验证
基本实验步骤 详细实验步骤 周期（工作日） 交付材料 1、基因合成 基因合成（密码子优化）/载体构建
分别将验证互作的蛋白构建到酵母载体pBridge和pGADT7上
10 个 1、构建的重组质粒
2、电子版文库实验报告1份
2、转化 重组质粒转化酵母细胞并进行自激活检验 7 个 3、互作验证 互作验证
实验组别设置如下：
实验组
阳性对照组
阴性对照组
pBridge空载阴性对照组
pGADT7空载阴性对照组
10 个
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