萤火素酶互补

萤火素酶互补技术

▼服务简介

借助于烟草(Nicotiana benthamiana)瞬时表达系统的萤火素酶互补实验(LCA),最初应用于哺乳动物细胞内蛋白质互作研究,后来用于检测植物蛋白质-蛋白质的相互作用,蛋白质-蛋白质相互作用在真核生物的各项生命活动中发挥重要作用。与其它蛋白质互作研究技术相比,LCA技术有其独特的技术优势。

▼技术原理

以萤火素(luciferin)为底物来检测萤火素酶(luciferase)的活性。在实验中, 萤火素酶蛋白被切成N端和C端2个功能片段, 即NLuc(2–416aa)和CLuc (398–550 aa),并分别连接在两个载体pCAMBIA-1300-NLuc (pNL)和pCAMBIA1300-CLuc (pCL)上。实验中, 待测的2个目标蛋白的编码序列分别连在两个载体上,将目标基因与报告基因融合, 获得含有目标基因的重组质粒。如果2个目标蛋白发生相互作用,萤火素酶的NLuc和CLuc就会在空间上足够靠近, 从而发挥萤火素酶活性,分解萤火素底物并产生荧光。

▼技术优势及应用场景

  1. 1、萤火素酶互补技术具有简单、灵敏、可靠、高效和低背景等优点, 并可轻松扩展为大规模蛋白质互作的筛选和验证研究。
  2. 2、萤火素酶互补技术因其高灵敏度、可定量化、操作简单高效被广泛应用于植物学和动物学蛋白质互作研究。

▼技术流程

▼实验案例

萤火素酶互补技术检测蛋白互作案例展示

▼参考文献

Zhou, Z., Bi, G., & Zhou, J.-M. (2018). Luciferase complementation assay for protein-protein interactions in plants. Current Protocols in Plant Biology, 3, 42–50. doi: 10.1002/cppb.20066

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