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无细胞蛋白表达

▼服务简介

无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统,是一种以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板,通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质,能实现目的蛋白质的体外蛋白合成,与传统的体内重组表达系统相比,体外无细胞合成系统具有多种优势。

▼服务优势

1、避开了细胞内环境对细胞表达的影响,可以人为控制反应条件和进程。瑞源生物的无细胞表达系统可对系统进行各项优化,如Tag优化、M优化、K优化,以此得到最优表达条件。

2、大大缩短实验周期。普通的表达过程需要2~3天,无细胞的表达过程则大大缩短到1~2小时,节省时间成本。

3、对常规细胞内难以表达的蛋白也可轻松解决,例如膜蛋白和毒性蛋白等。哺乳动物基因组的近三分之一由膜蛋白组成,其中约一半可以成为药物靶标,研究这些靶标膜蛋白,开发潜在的生物靶向药物,对疾病的致病机理及药物开发具有重要意义。

4、可以制备蛋白复合物,研究蛋白的相互作用。无细胞系统表达的蛋白可用于下游pull-down及凝胶迁移试验,研究蛋白-蛋白及蛋白-核酸相互作用。

5、可在特定位点插入非天然氨基酸。在特定位点插入非天然氨基酸,对重组蛋白类药物的研发具有重大意义。

6、可用于表达类颗粒病毒。这个表达产物既具有引起免疫响应的能力,又不含遗传物质,所以无法复制,是一类理想的病毒类疫苗。

▼技术对比

常规蛋白表达与无细胞表达的比较

▼技术服务方案

项目服务步骤及交付标准

无细胞蛋白表达纯化

技术流程

周期

交付标准

亚克隆构建至PD2P

2周

     1、原始数据、结果图片

     2、标准实验报告(含实验步骤、流程)

     3、蛋白总量:≥1mg

       蛋白浓度:≥25ug/ul

       纯度:≥85%

       产量:≥20ul

     无细胞表达+纯化

     1、蛋白表达

     2、蛋白纯化

     3、表达鉴定(WB)

     4、蛋白分装发货

3周

▼服务案例展示

A蛋白的无细胞表达实验方案

1、A-pD2P的载体构建;

2、目的基因pD2P模板的扩增;

扩增产物的 DNA 凝胶电泳结果(Marker15000

如下图所示:第一、二泳道为A的电泳结果图。

无细胞蛋白表达电泳图

3、pD2P 模板的ProteinFactory 蛋白质制造;

蛋白表达载体上含有eGFP,蛋白表达成功后的颜色为淡黄色。

结果如下图所示:

无细胞蛋白表达

4. 蛋白纯化

用含HIS标签的磁珠对蛋白进行纯化,纯化后的蛋白用Breadford法蛋白浓度测定试剂盒,检测蛋白浓度;

5. WB验证蛋白是否表达

WB实验结果如下图所示,用HIS抗体去杂目标蛋白,有目的条带。

实验结果表明A蛋白有表达。

无细胞蛋白表达 

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