无细胞蛋白表达
▼产品详情
产品货号：RY-D7029
产品规格：20ml
存储条件：室温保存
▼服务简介
无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统，是一种以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板，通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质，能实现目的蛋白质的体外蛋白合成，与传统的体内重组表达系统相比,体外无细胞合成系统具有多种优势。
▼服务优势
1、避开了细胞内环境对细胞表达的影响，可以人为控制反应条件和进程。瑞源生物的无细胞表达系统可对系统进行各项优化，如Tag优化、M优化、K优化，以此得到最优表达条件。
2、大大缩短实验周期。普通的表达过程需要2~3天，无细胞的表达过程则大大缩短到1~2小时，节省时间成本。
3、对常规细胞内难以表达的蛋白也可轻松解决，例如膜蛋白和毒性蛋白等。哺乳动物基因组的近三分之一由膜蛋白组成，其中约一半可以成为药物靶标，研究这些靶标膜蛋白，开发潜在的生物靶向药物，对疾病的致病机理及药物开发具有重要意义。
4、可以制备蛋白复合物，研究蛋白的相互作用。无细胞系统表达的蛋白可用于下游pull-down及凝胶迁移试验，研究蛋白-蛋白及蛋白-核酸相互作用。
5、可在特定位点插入非天然氨基酸。在特定位点插入非天然氨基酸，对重组蛋白类药物的研发具有重大意义。
6、可用于表达类颗粒病毒。这个表达产物既具有引起免疫响应的能力，又不含遗传物质，所以无法复制，是一类理想的病毒类疫苗。
▼技术对比
常规蛋白表达与无细胞表达的比较
▼技术服务方案
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项目服务步骤及交付标准 |
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无细胞蛋白表达纯化 |
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技术流程 |
周期 |
交付标准 |
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亚克隆构建至PD2P |
2周 |
1、原始数据、结果图片 2、标准实验报告(含实验步骤、流程) 3、蛋白总量：≥1mg 蛋白浓度：≥25ug/ul 纯度：≥85% 产量：≥20ul |
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无细胞表达+纯化 1、蛋白表达 2、蛋白纯化 3、表达鉴定（WB） 4、蛋白分装发货 |
3周 |
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▼服务案例展示
A蛋白的无细胞表达实验方案
1、A-pD2P的载体构建；
2、目的基因pD2P模板的扩增；
扩增产物的 DNA 凝胶电泳结果（Marker15000）
如下图所示：第一、二泳道为A的电泳结果图。
3、pD2P 模板的ProteinFactory 蛋白质制造；
蛋白表达载体上含有eGFP，蛋白表达成功后的颜色为淡黄色。
结果如下图所示：
4. 蛋白纯化
用含HIS标签的磁珠对蛋白进行纯化，纯化后的蛋白用Breadford法蛋白浓度测定试剂盒，检测蛋白浓度；
5. WB验证蛋白是否表达
WB实验结果如下图所示，用HIS抗体去杂目标蛋白，有目的条带。
实验结果表明A蛋白有表达。
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