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启动子文库工作菌液

▼产品简介

本产品由长度为10 bp的启动子片段和pHIS2 (Smal-lineared)载体同源重组构建文库质粒,含有多个克隆位点和限制性内切酶,可用TF centered Y1H筛库,筛选与转录因子互作的核心位点。

▼产品规格

产品编号

CAT:RY8006

产品规格

产品规格、询价请联系客户经理

保存条件

-80℃~-70℃保存,运输条件:干冰。

产品标准

文库库容量>1*108

重组率>95%

空载率<5%

▼产品优势

效率高

成本低

使用操作简易

可应对复杂样本

▼载体信息

▼实验指南

用含有pHIS2-启动子质粒的酵母工作菌液制备感受态,将pGADT7-诱饵质粒DNA转入其中,涂相应的筛选平板。

1. 冰上融化启动子文库酵母工作菌液,接于液体SD-T培养基50 ml,30℃,225 rpm,振荡培养24 h。

2. 转接于YPDA液体500 ml,使初始OD600=0.2,30℃,225 rpm,振荡培养4-5 h,至OD600=0.6。

3.离心收菌,室温,4000 rpm,5 min。

4.用30 ml无菌水重悬菌体,混匀,离心收菌,室温,4000 rpm,5 min,弃上清。

5.用20 ml 0.1M LiAc重悬菌体,混匀,离心收菌,室温,4000 rpm,5 min,弃上清。

6.用10 ml 0.1M LiAc重悬菌体,混匀,离心收菌,室温,4000 rpm ,5 min,弃上清。

7.向离心管中依次加入如下试剂,用枪头吹打混匀,或剧烈振荡1 min左右,至完全混匀。

 

50%PEG3350

1 M LiAc

ssDNA (10 mg/ml)

诱饵质粒DNA

9.6 ml

1.44 ml

300 ul

25 ug

 

8. 30℃水浴孵育,30 min。

9. 42℃水浴热激,25 min。

10. 30℃水浴复苏1 h。

11.离心收菌,室温,4000 rpm ,5 min,弃上清,用6 ml无菌水重悬菌体,尽量温和地混匀,从中取20 ul培养物稀释后涂SD-TL平板,用于检测文库转化效率。其余涂相应的平板20块。

12. 30℃恒温培养3-7天,观察菌落生长。

13. 挑取长出的克隆单菌落,转接到相对应的筛选平板中继续培养3-5天。

▼案例展示

▼注意事项

启动子文库酵母工作菌液避免反复冻融,使用时请在冰上解冻。

▼技术支持

本公司产品使用过程中如有任何疑问与建议,欢迎随时与我们联系:market@bestofbest.top

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