酵母表面展示是一种强大的技术，用于分离和改造蛋白质以提高其活性、特异性和稳定性。在该方法中，基因表达受启动子调控，分泌效率受分泌信号影响。此外，展示蛋白质的可及性和活性都受锚蛋白长度的影响。

日本学者在AMB Express期刊上发表了一篇名为” Evaluation of the yeast surface display system for screening of functional nanobodies”文章揭示了利用酵母表面展示技术筛选纳米抗体的系统平台。

理想的启动子、分泌信号和锚蛋白组合取决于感兴趣的蛋白质。在这项研究中，我们优化了适用于纳米体评估的酵母表面展示。我们设计了五种展示系统，它们使用了不同的启动子、分泌信号和锚蛋白组合。抗母鸡蛋白溶菌酶纳米体用作模型纳米体。显示在酵母细胞上的纳米抗体的数量，对与展示的纳米抗体结合的抗原数量和展示效率进行了量化。总体而言，我们改进了用于纳米体工程的酵母展示系统并提出了优化建议。

为了比较展示系统，我们试图确定它们的最佳培养条件。抗溶菌酶纳米体菌株和对照菌株均在25°C或30°C培养24小时。在每个采样点，对酵母细胞进行染色并进行流式细胞术分析（图 2a  ）。对照菌株对抗HA标签抗体和AF647标记的溶菌酶几乎没有非特异性吸收（图 2b）。在时程分析中，几乎所有系统在 Q2 区域中酵母细胞的最高比例都在12小时内（图 2c-g）。因此，在培养 12 小时后比较了五个展示系统。

图2 培养条件对展示效率的影响

在这项研究中，我们试图建立一种适用于纳米抗体的酵母展示系统。我们设计了五个展示系统来研究不同启动子、分泌信号、锚定蛋白和培养温度的影响。我们量化了酵母细胞上展示的纳米抗体的数量、与展示的纳米抗体结合的抗原数量以及展示效率，并观察到这些主要终点的值在很大程度上取决于参数。

总之，本研究检查了有关纳米抗体酵母表面展示的各种关键参数。在考虑评估纳米体文库制备的条件时，有两点很重要：首先，产生正确折叠的纳米体的酵母比例应该很高，其次，应该对每个突变体的结合能力进行精细评估。在此，显示在GAL1启动子下的展示效率高，并且在GAL1启动子下展示的纳米抗体的量少于在GAP启动子下的展示量。因此，预计在GAL1下亲合力效应会降低发起人。因此，我们可以评估亲和力，即展示的纳米抗体与其抗原的单一相互作用的强度。此外，我们证实了使用α前pro信号提高了纳米抗体的抗原结合能力，并且通过长锚蛋白提高了可接近性。总体而言，本研究中获得的知识将使我们能够在未来评估纳米抗体的制备。