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BMC|广西大学研究团队用Y2H技术揭示芒果中四种 MiTFL1 基因的过表达延迟了转基因拟南芥的开花时间

作者:南京瑞源生物技术有限公司 浏览: 发表时间:2021-09-18 11:35:29

花期过渡是高等植物生命周期中的一个重要阶段。花卉从营养阶段到生殖阶段的转变过程受复杂的内部信号和外部环境因素的调控。许多基因在这些过程中发挥着重要作用,所涉及的相互作用决定了分生组织的命运 。

广西大学研究团队在BMC Plant Biology发表了一篇名为“Overexpression of four MiTFL1 genes from mango delays the flowering time in transgenic Arabidopsis”的文章揭示了芒果中四种 MiTFL1 基因的过表达延迟了转基因拟南芥的开花时间


TERMINAL FLOWER 1 ( TFL1 ) 属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白 (PEBP) 家族,参与花序分生组织发育并抑制几种植物的开花。在本研究中,从芒果 ( Mangifera indica L.) 品种“SiJiMi”中克隆了四个TFL1基因,并将其命名为MiTFL1-1、MiTFL1-2、MiTFL1-3和MiTFL1-4。


Y2H 系统用于筛选与 MiTFL1 蛋白相互作用的蛋白质并验证它们的相互作用。诱饵载体pGBKT7-MiTFL1采用双酶切构建,未检测到自激活或毒性。将带有诱饵质粒的酵母细胞与'SiJiMi'的cDNA文库结合以筛选阳性克隆。在 Y2H 测定后,我们获得了 9 个与 MiTFL1-1 蛋白相关的候选蛋白,7 个与 MiTFL1-2 相关,6 个与 MiTFL1-3 相关,7 个与 MiTFL1-4 相关。从候选蛋白质中选择了三种与胁迫或开花相关的蛋白质,以在 DDO/X 和 QDO/X/A 培养基上进行进一步的点对点验证。三种蛋白质分别是碱性螺旋-环-螺旋蛋白13(bHLH13)、bHLH162和14-3-3D, pGADT7重组载体中含有候选蛋白bHLH13的细胞在QDO/X/A固体培养基上呈蓝色并显示正常生长,表明该蛋白与MiTFL1-2和MiTFL1-3蛋白相互作用。bHLH162 与 MiTFL1-1、MiTFL1-2 和 MiTFL1-4 相互作用,而 14-3-3D 仅与 MiTFL1-1 和 MiTFL1-2 相互作用。

 

结果

序列分析表明,编码的 MiTFL1 蛋白含有一个保守的 PEBP 结构域,属于 TFL1 组。表达分析表明,MiTFL1基因不仅在营养器官中表达,而且在生殖器官中也有表达,表达水平与花发育有关。四个MiTFL1基因的过度表达延迟了转基因拟南芥的开花。此外,MiTFL1-1和MiTFL1-3改变了一些转基因植物的花形态。酵母双杂交 (Y2H) 分析表明,几种应激相关蛋白与 MiTFL1 蛋白相互作用。


结论

四个MiTFL1基因表现出相似的表达模式,拟南芥中的过度表达导致开花延迟。此外,MiTFL1-1和MiTFL1-3过表达影响花器官发育。此外,MiTFL1蛋白可通过与bHLH和14种相互作用- 3-3蛋白质。这些结果表明MiTFL1基因可能在芒果的开花过程中起重要作用。


文献链接:10.1186/s12870-021-03199-9

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花期过渡是高等植物生命周期中的一个重要阶段。花卉从营养阶段到生殖阶段的转变过程受复杂的内部信号和外部环境因素的调控。许多基因在这些过程中发挥着重要作用,所涉及的相互作用决定了分生组织的命运 。
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