植物特异性抗霉病基因座 O (MLO) 蛋白包含七个跨膜域和一个保守的钙调蛋白结合域，在许多植物发育过程中发挥重要作用。

中国农业大学研究团队在MDPI发表了一篇名为“The Mildew Resistance Locus O 4 Interacts with CaM/CML and Is Involved in Root Gravity Response”的文章揭示了抗霉病位点 O 4 与 CaM/CML 相互作用并参与根系重力响应。

在这里，我们报告了拟南芥根中MLO4 蛋白的功能表征。MLO4 被鉴定为与 CML12 相互作用，在筛选来自拟南芥MLO的蛋白质与钙调蛋白/钙调蛋白样 (CaM/CML) 家族之间的相互作用时，使用酵母双杂交 (Y2H) 测定法。然后，通过LCI和双分子荧光互补 (BiFC) 检测进一步验证了 MLO4 和 CML12 之间的相互作用。遗传分析表明，mlo4、cml12和mlo4 cml12突变体在根重力响应中表现出类似的缺陷。这些结果意味着 MLO4 可能通过与 CML12 的相互作用在根系重力响应中发挥重要作用。此外，我们的结果还表明 MLO 和 CaM/CML 家族之间的相互作用可能是保守的。

MLO 蛋白在 C 端区域包含 CaMBD 。因此，Y2H 使用 15 种 MLO 蛋白的 C 端区域来表征 MLO 和 CaM/CML 蛋白的相互作用。结果表明，每种MLO蛋白可能与酵母细胞中的至少一种CML蛋白相互作用。特别是，参与花粉管接收的 NTA/MLO7 可以与多达 11 种候选 CML 蛋白相互作用，包括 CML8-12、CML26、CML30、CML37、CML38、CML40 和 CML40。对三种密切相关的蛋白质 MLO4、MLO11 和 MLO14 的测定也获得了类似的结果，这些蛋白质在根系形态发生中发挥作用 [ 11]]。MLO4 与 CML12、CML40 和 CML44 相互作用。MLO11 与 CML47 相互作用。MLO14 与 CML17、CML18 和 CML49 相互作用。

首先选择MLO4和CML12来验证Y2H筛选的结果（图S1）。然后，LCI 结果显示 CML12 与烟草细胞中的 MLO4 全长相互作用（图2a ）。BiFC 结果表明 CML12 与 MLO4 的细胞质结构域相互作用，与 Y2H 结果一致。此外，当 MLO4 的全长用于检测时，交互信号仅在质膜上检测到，质膜与膜染料 FM 4-64 的染色信号共定位（图2b）。该结果与从具有信号肽和七个跨膜结构域的 MLO4 的膜定位获得的结果一致 。

图 2. CML12 与 MLO4 互作

总之，响应细胞外信号，MLO 蛋白似乎调节质膜上 SNARE 依赖性囊泡转运相关过程，与 Ca 2+信号传导密切相关，可能是通过与 CaM/CML 相互作用。

MLO 蛋白是植物独有的 。尽管一些mlo突变体已被表征，但 MLO 蛋白调节 CaM 的机制仍然知之甚少。MLO 在调节 Ca 2+负载的 CaM/CML 中的生化功能也仍然难以捉摸。