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CP|中国科学院研究团队揭示了植物中蛋白质-蛋白质相互作用的荧火素酶互补分析

作者:南京瑞源生物技术有限公司 浏览: 发表时间:2021-06-08 14:12:56

组成型和动态的蛋白质-蛋白质相互作用是细胞过程所有方面的基础。与其他测量植物蛋白质-蛋白质相互作用的技术相比,荧火素酶互补测定法具有许多优点:它可以实时检测植物蛋白质-蛋白质相互作用,几乎无需动手操作样品,高度定量,背景极低,并且可以很容易地扩大规模以进行高通量交互组研究。

2018年4月2日中国科学院研究团队在CP发表了一篇名为“Luciferase Complementation Assay forProtein-Protein Interactions in Plants”揭示了植物中蛋白质-蛋白质相互作用的荧火素酶互补分析。


荧火素酶互补试验,也称为特异性免疫疾病,最初是在活体哺乳动物细胞中开发的,但是后来被采用了蛋白质-蛋白质相互作用研究。在这种情况下,脱氧核糖核酸分裂成n-和c-末端片段(NLuc和Luc)并转移到蛋白质中。这两个片段是酶活性的,但两个蛋白质的相互作用导致了空间上的紧密接近,从而恢复了荧光的分析活性。这导致了光通过氧化的发射,影响了荧光的消除,并且可以由光度计或电荷耦合器件成像系统直接检测到。迄今为止,这种方法已被广泛用于各种蛋白质-蛋白质相互作用研究。在这里,我们描述了细菌介导的细菌完成瞬时荧火素酶在烟草中的表达高通量蛋白质相互作用。


共包括四个主要部分。第一个步骤包括将基因编码到目标质粒中,包含克隆和成功的编码序列,并在土壤杆菌中引入终止质粒。第二,农杆菌细菌包含渗入到底栖动物中的不同种类的细菌,这些细菌重组后可以被转移到植物细胞中。检测了叶组织中表达的测试蛋白,并测试了它们的发光强度,这表明了蛋白-蛋白的相互作用。最后,提取总蛋白,然后进行盐析分析和聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后进行蛋白质印迹,以确定含有特定抗体的受试蛋白的数量。

CCD成像系统检测蛋白质相互作用的实例

迄今为止,已经开发了许多技术来研究植物系统中蛋白质-蛋白质相互作用。除了体外蛋白质组学分析之外,一些热方法,包括双向杂交(Y2H)分析、coIP、BiFC和RET,也可用于研究体内蛋白质-蛋白质相互作用。Y2H方法可用于高通量研究蛋白质-蛋白质相互作用和孔相互作用,因为其分析在异源系统中进行,可产生假阳性和假阴性。


文献链接:10.1002/cppb.20066

CP|中国科学院研究团队揭示了植物中蛋白质-蛋白质相互作用的荧火素酶互补分析
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