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南京林业大学转录因子自激活序列定位案例解析

作者:南京瑞源生物技术有限公司 浏览: 发表时间:2020-10-16 15:57:22

实验原理

针对已知能与启动子结合的调控蛋白/转录因子,进行生物信息学方法预测,得到可能的目标调控蛋白/转录因子,通过Smart分析,设置合理截短方案,可以方便高效地寻找转录因子核心激活区域。


技术路线


Samrt数据库分析 


N端、C端载体构建


全长、N端、C端自激活测试


根据第一轮结果,设计截短方案


载体构建


自激活验证测试

   

好的实验技术出好的实验结果,自南京瑞源生物技术有限公司成立以来,已与广大高校开展分子生物学服务项目合作,包括中国农业大学,中国科学院,南京农业大学等知名高校,下面就向大家展示一下南京林业大学陈老师的转录因子自激活实验结果。



全长自激活测试实验结果


结果分析:对照菌株在SD-T缺陷平板上都能正常生长,而在SD-TH、SD-THA、SD-THA+x-α-gal缺陷平板不能生长。pGBKT7-XL82pGBKT7-XL82-C、pGBKT7-XL82-N、pGBKT7转化子中随机挑选的菌落在SD-T缺陷平板上均能生长,而在SD-TH、SD-THA平板上,pGBKT7-XL82pGBKT7-XL82-C均能正常生长,pGBKT7-XL82-N与阴性对照一致。在SD-THA+x-α-gal平板,pGBKT7-XL82pGBKT7-XL82-C能正常生长,并能显色,而pGBKT7-XL82-N与阴性对照pGBKT7一致。
结论pGBKT7-XL82pGBKT7-XL82-C有自激活现象,pGBKT7-XL82-N没有自激活现象。

基因截短自激活实验结果


结果分析:对照菌株在SD-T缺陷平板上都能正常生长,而在SD-TH、SD-THA、SD-THA+x-α-gal缺陷平板不能生长。pGBKT7-XL82-C-C转化子中随机挑选的菌落在SD-T、 SD-TH、SD-THA、SD-THA+x-α-gal缺陷型平板上生长,并能在SD-THA+x-α-gal平板上显蓝色。pGBKT7-XL82-C-N在SD-T、 SD-TH、SD-THA、SD-THA+x-α-gal平板上与阴性对照pGBKT7一致。

结论:pGBKT7-XL82-C-C有自激活现象,pGBKT7-XL82-C-N没有自激活现象。

南京林业大学转录因子自激活序列定位案例解析
针对已知能与启动子结合的调控蛋白/转录因子,进行生物信息学方法预测,得到可能的目标调控蛋白/转录因子,通过Smart分析,设置合理截短方案,可以方便高效地寻找转录因子核心激活区域。
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