400-863-8520

TEL    025-57671761

Front. Plant Sci|百脉根泛素连接酶SIE3与转录因子SIP1的相互作用

Front. Plant Sci|百脉根泛素连接酶SIE3与转录因子SIP1的相互作用

2020612日,华中农业大学农业微生物学国家重点实验室的研究人员于上发表了题为“The Lotus japonicus Ubiquitin Ligase SIE3 Interacts With the Transcription Factor SIP1 and Forms a Homodimer”的研究文献,该文献揭示了百脉根中泛素连接酶SIE3与转录因子SIP1的相互作用并形成了二聚体。

背景:共生受体激酶SymRK在共生信号转导和结节器官生长中起重要作用。但如何将共生信号从SymRK传递到下游仍难以确定。在这里,我们用酵母双杂和烟草验证了SIE3SIP1的相互作用。为进一步研究SymRK介导的信号通路的调控机制以及结节器官中E3连接酶的生物学功能提供了基础。

文章来源

结果:

为了验证SIP1SIE3是否存在相互作用,我们进行了酵母双杂交Y2H)分析。酵母细胞BD-SIE3/AD-SIP1AD-SIE3/BD-SIP1在四倍缺失SD培养基上生长,其β-半乳糖苷酶活性显著高于阴性对照。结果表明,酵母细胞中SIE3SIP1存在相互作用。

 酵母细胞中相互作用和免疫水平印迹

1.A.酵母细胞中SIE3SIP1之间的相互作用.B.酵母细胞中蛋白质水平的免疫印迹分析。

 

在烟草中进行了双分子荧光互补BiFC)分析以确定SIE3/SIP1相互作用是否在植物体内发生。结果表明SIP1SIE3在植物中相互影响。

BiFC测定结果

2. A.植物中SIE3SIP1的相互作用的BiFC测定.用表达SCC::SIP1SIE3::SCN的土壤杆菌细胞共转染烟草叶.B.烟草中表达的蛋白质的免疫印迹分析.

 

在植物中观察到SIE3表达的高分子量,根据其大小,认为该条带可能对应于SIE3同型二聚体。进一步研究结果表明,上带对应于SIE3同二聚体,下带对应于单体,并且反应混合物中DTT的存在有助于稳定SIE3单体。

二聚化影响

3. DTTSIE3二聚化的影响.

 

为了研究SIE3均二聚所需的肽结构域,使用Y2H分析来测试它们之间的相互作用。结果表明,CRA-RanBPM域对于SIE3的自我互作至关重要。

功能域及其突变体构建

4. A. SIE3的功能域及其突变体构建体.CTLH(对于LisHC末端),CRA(对于CT11-RanBPM),RING(对于新基因).SIE3-ΔRING缺少RING域,SIE3-ΔCR缺少CRA-RanBPMRING.B.酵母细胞中SIE3SIE3缺失突变体之间的相互作用.将携带该构建体的酵母细胞置于SD/-Trp-LeuSD-2)培养基上,并选择在SD/-Trp-Leu-His-Ade/X-galSD-4SD-4/X-gal)上进行蛋白质-蛋白质相互作用.p53/SV40Lam/SV40的组合分别用作阳性和阴性对照.C.酵母细胞中SIE3-C266SSIE3缺失突变体之间的相互作用.

 

假设Cys266可能是控制SIE3同型二聚化的关键残基,进一步研究表明,用Cys266取代了丝氨酸的SIE3无法在酵母或烟草细胞中形成同型二聚体。表明SIE3的二聚化是通过Cys266形成二硫键介导的。


免疫印迹分析5. A.将烟草与表达SIE3::SCNSCC::SIE3等的农杆菌细胞共转染,并与SCC :: C266S等组合阳性对照,而NFR5::SCNSCC::C266S的组合用作阴性对照.B.烟草中表达的蛋白质的免疫印迹分析.

 

PCR分析表明,SIE3-OXSIE3-C266S-OX毛状根中转基因的表达水平比对照高3–15倍。这些数据表明SIE3的半胱氨酸-266对于其在促进百脉根的结瘤中的是必不可少的。

根瘤表型


6. A.WTSIE3-OXSIE3-C266S-OX毛状根的根瘤表型.B.每株具有改变的SIE3SIE3-C266S转录水平的转基因毛状根的根瘤数.C.对照SIE3-OXSIE3转录水平的分析.D.Enod40-1qPCR分析对照和转基因毛状根中的转录水平.

 

结果:

SIE3SIP1在酵母细胞和植物体内相互作用,SIE3可以通过Cys266上的二硫键形成同型二聚体,并且SIE3Cys266处的突变消除了其在共生中的作用。在反应过程中,SIE3单体可能已变成均二聚体。总之,SIE3似乎代表了植物中一种新型的二聚E3泛素连接酶。SIE3在百脉根促进根瘤形成中必不可少。本研究为SymRKSIE3SIP1之间的复杂关系提供了新的思路,并为进一步研究SymRK介导的信号通路的调控机制以及结节器官中E3连接酶二聚化的生物学功能提供了基础。


下载原文

Front. Plant Sci|百脉根泛素连接酶SIE3与转录因子SIP1的相互作用
2020年6月12日,华中农业大学农业微生物学国家重点实验室的研究人员于上发表了题为“The Lotus japonicus Ubiquitin Ligase SIE3 Interacts With the Transcription Factor SIP1 and Forms a Homodimer”的研究文献,该文献揭示了百脉根中泛素连接酶SIE3与转录因子SIP1的相互作用并形成了二聚体。
长按图片保存/分享

友情推荐:南京维百瑞生物科技有限公司

图片展示

电话:400-863-8520;025-5767-1761

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

图片展示

微信公众号

图片展示

微信小程序

版权所有 南京瑞源生物技术有限公司       苏ICP备20003978号      技术支持:飞色网络

Copyright © 瑞源生物

苏ICP备20003978号

联系电话
400-8638520
联系电话
025-57671761
二维码
二维码