猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定


中文标题:猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

文章作者:李晓月  王春来  倪宏波

发表单位:黑龙江八一农垦大学动物科技学院

中文核心期刊:黑龙江八一农垦大学学报

文献下载

研究内容:

为了对HPSCDT三个亚基在致病方面的作用有一个全面和宏观的了解,我们以PK-15细胞为研究对象,利用猪的全基因组芯片microarray杂交方法检测了不同亚基处理后细胞的基因表达谱。结果提示CdtA亚基和CdtB亚基可能在与PK-15细胞结合方面更为重要,这要与之前报的其他细菌的CDT作用方式是不一致的。有一项结果提示C亚基也有可能进入细胞并发挥细胞毒作用,在抗氧化方面显示出了重要作用。对于不同的靶细胞,HPSCDT的不同亚基在于细胞结合以及细胞毒方面可能具有不同的作用。

蛋白相互作用对研究宿主互作方面有极其重要作用,有助于对已知全长基因但未知功能的基因的功能分析。酵母双杂交系统多用于检测已知蛋白间相互作用,可对研究基因功能验证闭。酵母双杂交操作可以巧妙的把复杂的蛋白互作转换成简易的核酸研究,并能进行高通量的蛋白筛选,为蛋白互作的研究提供了快捷的途径闭。

利用SMART技术构建PK-15细胞三框cDNA文库,用于筛选猪伪狂犬病病毒与宿主细胞间相互作用蛋白。但没有研究与HPSCDT不同亚基蛋白相互作用的,我们选用PK-15细胞模型,筛选与其相互作用的蛋白,对其筛选到的蛋白进行分析,阐释CdtA亚基、CdtB亚基及CdtC亚基在细胞结合方面及毒性方面,各亚基所起的作用。纯化的dscDNA经琼脂糖凝胶电泳检测,呈弥散分布,大小集中在250~2000范围内,符合建库的要求。从收集的文库鉴定可知,文库的容量、插入片段及文库的多态性,均达到筛选酵母双杂交互作蛋白的文库要求,此文库为今后筛选与HPSCDT不同亚基蛋白相互作用的蛋白奠定了基础。

猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
蛋白相互作用对研究宿主互作方面有极其重要作用,有助于对已知全长基因但未知功能的基因的功能分析。酵母双杂交系统多用于检测已知蛋白间相互作用,可对研究基因功能验证闭。酵母双杂交操作可以巧妙的把复杂的蛋白互作转换成简易的核酸研究,并能进行高通量的蛋白筛选,为蛋白互作的研究提供了快捷的途径闭。
长按图片保存/分享

友情推荐:南京维百瑞理化激素检测服务公司

图片展示

电话:400-863-8520;025-5767-5161

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

科研快递订阅

  • 名字 *

  • 邮箱 *

  • 电话

  • 机构 *

  • 提交

  • 验证码
    看不清?换一张
    取消
    确定

咨询留言

  • 姓名 *

  • 电话 *

  • 留言 *

  • 提交

  • 验证码
    看不清?换一张
    取消
    确定

Copyright © 南京瑞源生物技术有限公司 版权所有      苏ICP备20003978号

Copyright © 瑞源生物

苏ICP备20003978号

联系电话
400-8638520
联系电话
025-57671761
二维码