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分子互作新技术-Biacore系统(表面等离子偏振技术)

    今天要考考各位小伙伴了,研究分子互作有哪些方法呢?有酵母双杂交实验,Elisa酶联免疫吸附实验,COIP免疫共沉淀实验。还有我们最熟悉的Western实验也是其中的一种哦,核酸方面可以选择EMSA或染色质免疫共沉淀。这些技术当中,有些方法耗时耗力且步骤繁琐,如Western,EMSA。大部分的方法都只能检测强相互作用,且检测时需要进行标记,检测的通量也较低。今天为大家介绍一个新方法Biacore系统,视频介绍Biacore的检测原理和过程,视频大约1分钟。

    Biacore系统基于SPR表面等离子偏振技术,简单的来说就是把一个样品作为配体固定在芯片上,另外一个样品作为流动相流经芯片表面,如果两个样品间存在相互作用,流动相中的样品会被芯片上的配体捕获,引起光信号和电信号的变化,Biacore可以检测到这种变化,所以该方法灵敏度极高,且对样品消耗少。Biacore的研究范围从分子量低于100道尔顿的有机化合物到核酸,蛋白质,甚至是到细胞和病毒,均可以进行分析。Biacore能提供的信息包括动力学,亲和力,特异性,热力学和浓度等。所以研究两个蛋白之间是否有相互作用对Biacore来讲都是小case,Biacore系统一天能测定多少个样品呢?一百个肯定是不在话下!整个结合和解离过程如下图所示:

Biacore结合和解离过程

如何实现这个过程呢?首先选择合适的芯片,将您的一个样品偶联在芯片上,今天为大家简单介绍几种芯片,我们最常用的CM5 芯片,SA链霉亲和素芯片,NTA芯片,ProteinA芯片。各芯片基本信息如下:

1. CM5芯片表面有羧基基团,可以利用化学试剂将含有氨基的样品直接固定在芯片上。

2. SA链霉亲和素芯片可以直接偶联带有亲和素标签的样品。

3. NTA芯片可以结合二价的Ni离子,Ni离子又能结合带有His标签的蛋白。

4. Protein A芯片可以直接结合抗体类样品。

当样品被固定在芯片上后,流动相从表面流过,若存在结合,Biacore系统便可以检测到,使用再生试剂后,可以将流动相或者配体从芯片上洗脱下去,进行新一轮的其他样品的分析,一个芯片可以测多个样品,快速实时检测分子互作,Biacore很OK.

注:文中部分图片和内容来自GE



分子互作新技术-Biacore系统(表面等离子偏振技术)
Biacore系统基于SPR表面等离子偏振技术,就是把一个样品作为配体固定在芯片上,另外一个样品作为流动相流经芯片表面,如果两个样品间存在相互作用,流动相中的样品会被芯片上的配体捕获,引起光信号和电信号的变化,该方法灵敏度极高,且对样品消耗少。
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