▼ 服务简介
酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等
▼ 应用领域
植物
自交不亲和机理研究
病毒
朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选
信号通路
转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选
癌症医学
癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选
寄生虫医学
毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选
基础原理研究
肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育
▼服务流程
▼ 样本要求
细胞样本：细胞数量大于1×10^7
动物样本：大于1 g
植物样本：大于2 g
总RNA：大于200 µg
▼ 服务内容
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酵母文库构建 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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RNA提取 |
RNA提取 mRNA分离 |
5天 |
酵母单杂文库甘油菌1.5ml EP管（1管） 酵母单杂文库质粒1.5ml EP（1管） Word文档电子版项目报告 |
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cDNA文库构建 |
cDNA合成与接头连接（三框库） cDNA按长度分离 均一化处理（可选） 重组到酵母单杂交载体pHis2上和电转化 文库检测和质粒提取 数据整理和分析
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25天 |
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酵母单杂交文库筛选 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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启动子背景筛查 |
Binding seq基因启动子的背景筛查 |
10天 |
阳性克隆测序结果 Word文档电子版项目报告 |
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文库筛选 |
诱饵质粒转化和文库质粒转化 酵母筛选和3AT条件优化 筛选结果测序
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30天 |
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回转验证 |
筛选结果回转验证 数据整理和分析
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10天 |
阳性克隆酵母质粒 Word文档电子版项目报告 |
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酵母单杂交一对一验证 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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启动子背景筛查 |
Binding seq基因启动子的背景筛查 |
10天 |
阳性克隆酵母菌株 Word文档电子版项目报告 |
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一对一验证 |
实验组：pHis-A+pGADT7-B 阳性对照 阴性对照 |
10天 |
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