GFP标签抗体免疫共沉淀试剂盒

Anti-GFP标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法)

▼产品简介

免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术，通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠)，或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠)，然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物，从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来，随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等。

GFP标签的优点是便于观察，适合于观察蛋白在细胞内的定位，不用破碎组织细胞、不加任何底物、不用抗体，直接通过荧光显微镜就能在活细胞中观察到发出的绿色荧光，实时观察目的蛋白的表达情况，而且荧光性质稳定，细胞内的其它产物不会干扰GFP标签蛋白的检测，从而使其检测快速、简便、灵敏度高、重现性强，所以GFP被誉为活细胞探针。

▼产品规格

产品编号

CAT：RY8023

产品规格

配体	抗GFP标签抗体
磁珠表层材料	超顺磁亲水高分子磁珠
粒径大小	200nm
浓度	10mg/ml
结合量	>1.2mg/ml磁珠（对GFP标签蛋白的结合量）
建议pH使用范围	6~8
沉降系数	2mg/ml磁珠在60ul以下体积沉降时间应该不大于10s
磁珠保存液	1*PBS
保存	4℃，禁止冷冻，使用前请充分混匀

▼产品概述

抗GFP标签抗体免疫磁珠由高性能的特异性 IgG1 单克隆抗体与磁珠共价偶联，后期经过封闭处理，可以直接用于捕获GFP标签蛋白，具有较高的GFP标签融合蛋白结合量以及非特异结合低的特点，可用于GFP标签蛋白免疫沉淀以及蛋白的分离纯化。

▼应用场景与产品优势

Anti-GFP磁珠，也称Anti-GFP免疫磁珠或GFP抗体磁珠，是由高品质的重组GFP抗体与纳米级氨基磁珠共价偶联而成，可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有GFP标签的蛋白结合，从而用于带有GFP标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化。

本产品特异性强，靶蛋白结合量高：每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有不少于0.6mg GFP抗体，通常可结合不少于1.2mg GFP标签融合蛋白，具体的最大结合量和标签蛋白的分子量大小等相关。每500微升样品，通常仅需使用10-20微升磁珠悬浊液，就可以高效地进行免疫沉淀实验。

▼服务项目

▼实验流程

1.磁珠的准备

1.1 用移液枪轻柔吹打重悬Anti-GFP标签免疫磁珠，转移10-20 μL免疫磁珠到新的离心管中（实际取用量可根据样品中目的蛋白的含量适当增减）。

1.2 加入1ml PBS缓冲液，用移液枪轻柔吹打重悬免疫磁珠，磁力架上静置实现磁液分离后, 移除上清，重复上述步骤2次。

2.样品的结合

2.1 加入500 μL细胞裂解液，室温旋转混匀孵育2小时或者4°C条件下过夜。

2.2 磁力架上静置实现磁液分离后，将上清液转移到新的离心管中备用（上清液可能还有过量的GFP标签目的蛋白）。

3.磁珠洗涤

3.1 加入1mL PBS缓冲液洗涤磁珠，磁力架上静置实现磁液分离后, 移除上清。

3.2 重复洗涤大约3次。

4.目的蛋白洗脱

4.1对于直接检测目的蛋白的情况，在上述所得沉淀中加入50 μL 1×蛋白上样缓冲液，煮沸5 min，在磁力架上静置实现磁液分离后，吸取上转移到新的离心管中。

4.1 取上清进行SDS-PAGE检测。

▼实验案例

▼技术支持

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