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EMSA

▼服务简介

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

▼服务简介

凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。基于DNA-蛋白质或RNA-蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理,当转录因子与特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。

这一技术最初用于研究DNA结合蛋白质,目前已用于研究RNA结合蛋白质和特定的RNA序列的相互作用。竞争实验中采用含蛋白质结合序列的DNA或RNA探针,和其它相关的探针,来确定它们相互作用的特异性及强度。

 

如图所示, DNA-复合物比非结合的探针移动得慢;当检测DNA结合蛋白,可用纯化蛋白、部分纯化蛋白或核细胞抽提液;竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA片段和寡核苷酸片段(特异)和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA结合蛋白的特异性;在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

▼服务流程

标准蛋白样品制备与定量 > 探针设计合成 > 蛋白与探针等进行反应 > SDS-PAGE电泳 > 紫外胶联 > 杂交孵育 > 图片扫描

▼样品要求

提供样品

1) 活细胞(>2×10^7)、纯化的蛋白、DNA样品及序列;

2) 目的蛋白一抗及其说明书;

3) 基因信息、蛋白信息、物种信息;

4) 阳性对照样品(尽量提供)。

▼交付标准

1、原始数据、结果图片

2、标准实验报告

3、SCI标准Result Figure

▼服务内容

服务项目

说明

报价

周期

荧光标记探针

 

利用近红外荧光标记探与蛋白结合在疑胶板上通过

近红外扫描仪直接测定电泳位置

 

询价

3~5个工作日

 

蛋白标准样品的制备

与浓度精确测定

 

蛋白样品制备要现配现用

 

1~2周

EMSA凝胶电泳迁移检测

 

1个探针和1个蛋白做一个EMSA反应

(4条泳道,包括1条free probe泳道,3条蛋白梯度泳道)

 

 

3~5个工作日

 

结合蛋白的纯化与质谱检测

(未知蛋白需要检测)

 

条带切胶蛋白纯化,质谱检辺进行肽段检索与聚类分析

 

1周

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电话:400-863-8520;025-5767-1761

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

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