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Gene-centered Y1H 

▼服务简介

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

▼应用领域

植物
自交不亲和机理研究
病毒

朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路

转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学

癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学

毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究
肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

▼服务流程

▼样本要求

    细胞样本:细胞数量大于1×10^7

    动物样本:大于1 g

    植物样本:大于2 g

    总RNA:大于200 µg

▼服务内容

酵母文库构建

基本实验步骤

详细实验步骤

   周期  

交付材料

RNA提取

RNA提取     mRNA分离

5

酵母单杂文库甘油菌1.5ml EP管(1管)

酵母单杂文库质粒1.5ml EP1管)

Word文档电子版项目报告

cDNA文库构建

 

cDNA合成与接头连接(三框库)

cDNA按长度分离

均一化处理(可选)

重组到酵母单杂交载体pHis2上和电转化 

文库检测和质粒提取

数据整理和分析

 

25

       

 

 

酵母单杂交文库筛选

基本实验步骤

详细实验步骤

   周期   

交付材料

启动子背景筛查

Binding seq基因启动子的背景筛查

10

阳性克隆测序结果

Word文档电子版项目报告

文库筛选

 

诱饵质粒转化和文库质粒转化

酵母筛选和3AT条件优化

筛选结果测序

 

30

回转验证

 

筛选结果回转验证

数据整理和分析

 

10

阳性克隆酵母质粒

Word文档电子版项目报告

       

 

 

酵母单杂交一对一验证

基本实验步骤

详细实验步骤

   周期   

交付材料

启动子背景筛查

Binding seq基因启动子的背景筛查

10

阳性克隆酵母菌株

Word文档电子版项目报告

一对一验证

实验组:pHis-A+pGADT7-B

阳性对照      阴性对照

10

 

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