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酵母双杂是一种利用酵母表达系统分析蛋白质相互作用的技术,它具有高度敏感性和广泛应用性。
DUAL membrane 系统(DUAL membrane system)首先由瑞士的Dualsystems Biotech AG 公司开发出来,是基于分离的泛素(split-ubiquitin)介导的膜蛋白酵母双杂交系统,泛素可以分成两部分表达,即其N端部分(NubI)和C端部分(Cub),后者融合有能启动核内报告基因表达的LexA蛋白。NubI和Cub-LexA在细胞中组成可分离的泛素蛋白体系,断裂的泛素的两部分分别连接一个蛋白,且两个蛋白之间存在相互作用。它提供了不同于常规酵母双杂交系统的蛋白体内分析方法,使得分析膜蛋白间的互作成为现实。
基于酵母单杂交技术建立了一种以转录因子为中心鉴定其识别作用元件的技术,命名为TF- centered YIH。该技术能够准确、快速简捷、高效的鉴定出转录因子识别的元件,在蛋白质与DNA元件的互作研究中有着广阔的应用前景。
酵母逆境基因筛选及验证
酵母高通量抗逆基因筛选服务能够快速筛选岀非模式抗逆物种资源中的多重逆境抗性相关的大量基因,利用酵母菌,在逆境筛选系统下,通过抗性梯度实验对基因组范围内的抗性相关基因进行筛查,利用蛋白组学寻找候选蛋白,进行蛋白水平上的表型验证。
南京瑞源生物在基于传统蛋白互作的基础上,通过自主研发优化,与时俱进,开发了一项深度学习预测蛋白相互作用的模型AI-PPI。预测蛋白与蛋白互作,预测纳米抗体与蛋白互作
酵母三杂交文库构建及筛库
酵母三杂交技术是由酵母双杂交技术改进而来的,这套系统引进了一个pBridge的质粒,这个质粒的特点是能够同时插入两个外源蛋白,在MCSI插入的蛋白的N端仍然融合Gal4系统中的BD结合域氨基酸多肽片段,而在MCSII中插入的蛋白不融合任何标签,但是在其上游有一个Pmet25启动子,这个启动子的特点是只有在甲硫氨酸(Met)缺乏的时候才能工作,使下游蛋白基因表达,所以必须要在甲硫氨酸缺陷型培养基中进行实验。
单链可变区片段是由抗体重链的可变区与轻链的可变区在一段肽链的连接下构成的小分子,是具有抗体活性的最小功能结构单位,是目前研究较多、应用较为广泛的重组抗体,其不包含抗体恒定区,但仍表现出与抗原的高亲和力,应用 Y2H 系统在真核细胞酵母内筛选scFv,其产生的抗体有可能保持天然的折叠状态从而更接近体内的真实水平。
酵母一对一验证是一种利用酵母菌进行转化和筛选的方法,主要用于筛选具有相互作用的两种细胞信号传导系统或两种基因产物之间的相互作用
酵母信号肽筛选技术
南京瑞源生物提供酵母信号肽筛选及验证信号肽分泌功能服务。试验中选用的酵母菌株为缺失蔗糖转化酶基因、在以蔗糖为唯一碳源的培养基上不能生长的 YTK12。选用的载体质粒为含有色氨酸合成基因和一个缺失信号肽与起始密码子 ATG 的蔗糖转化酶基因(SUC2)的 pSUC2。 当一个具有功能的信号肽连接到 pSUC2的蔗糖转化酶基因之前时可以恢复蔗糖转化酶的分泌功能,从而使 YTK12菌株可在以棉子糖为碳源的缺陷型培养基上生长。 此外, TTC显色反应也常用于验证结果。
AI数字化模拟文库
南京瑞源生物开发了多个全面涵盖不同物种转录因子(TF)的数字化模拟文库,适用于数字化筛选技术。数字化筛库是一种利用计算机进行高通量文库筛选的方法,可以快速、高效、全面地发现与特定蛋白互作的基因。
酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等
在一定条件下,酶具有催化一定化学反应的能力。酯酶是一种水解酶催化剂,可在水分子的参与下,经由水解作用,将酯类切割成酸类与醇类。在酯酶的筛选中,底物为三丁酸甘油酯,在标准的琼脂平板培养基中会乳化,乳化的三丁酸甘油酯给培养基带来混浊的外观,通过酯酶的水解可以看到菌落周围的清净或水解圈,以此来判断酯酶的活性。